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飄雪3889木蟲 (小有名氣)
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[求助]
求教PCR引物設(shè)計(jì)的相關(guān)問題
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要設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物,求教各位的經(jīng)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖且獜哪痴婧宋⑸镏姓业矫傅幕蛐蛄,再克隆表達(dá)。這個(gè)酶的基因序列未知,打算從其他物種里面的同種酶來設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物。在選擇上,是必須要從親緣關(guān)系很近的物種找起嗎?我這個(gè)酶所具有的催化效果,在真核微生物里面報(bào)道得不多,植物里面倒是很多見。另外,有哪些公司是專業(yè)設(shè)計(jì)這個(gè)的,麻煩大家多告訴我一下。 |
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1,找到親緣關(guān)系較近的其他真核生物(盡量多找) 2,去NCBI上查找這些真核生物,看看有沒有你所需酶的基因序列 3,拿到這些真核生物酶的基因序列,在DNAMAN上比對(duì),對(duì)照簡(jiǎn)并表,設(shè)計(jì)引物。 不過我以前做的片段太長了,簡(jiǎn)并引物擴(kuò)不出來,后來還是現(xiàn)在保守序列那里設(shè)計(jì)特異性引物,然后做了RACE。 |
銅蟲 (小有名氣)
| 想要那到一個(gè)基因的序列,大多數(shù)情況是用RACE,想要通過一次PCR就得到,那RACE技術(shù)就可以退出了。在保守區(qū)設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物,如上樓所述就行,要有多對(duì),引物越多機(jī)會(huì)越大,5-6對(duì)挺好。買個(gè)takara RACE就行了。前提是要有好的RNA。 |
木蟲 (小有名氣)
銅蟲 (小有名氣)
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