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飄雪3889木蟲 (小有名氣)
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[求助]
求教PCR引物設(shè)計(jì)的相關(guān)問題
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要設(shè)計(jì)簡并引物，求教各位的經(jīng)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖且獜哪痴婧宋⑸镏姓业矫傅幕蛐蛄�，再克隆表達(dá)。這個酶的基因序列未知，打算從其他物種里面的同種酶來設(shè)計(jì)簡并引物。在選擇上，是必須要從親緣關(guān)系很近的物種找起嗎？我這個酶所具有的催化效果，在真核微生物里面報(bào)道得不多，植物里面倒是很多見。另外，有哪些公司是專業(yè)設(shè)計(jì)這個的，麻煩大家多告訴我一下。 |
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| 想要那到一個基因的序列，大多數(shù)情況是用RACE，想要通過一次PCR就得到，那RACE技術(shù)就可以退出了。在保守區(qū)設(shè)計(jì)簡并引物，如上樓所述就行，要有多對，引物越多機(jī)會越大，5-6對挺好。買個takara RACE就行了。前提是要有好的RNA。 |
飄雪38893樓2013-05-02 10:25:51
【答案】應(yīng)助回帖
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1，找到親緣關(guān)系較近的其他真核生物（盡量多找） 2，去NCBI上查找這些真核生物，看看有沒有你所需酶的基因序列 3，拿到這些真核生物酶的基因序列，在DNAMAN上比對，對照簡并表，設(shè)計(jì)引物。 不過我以前做的片段太長了，簡并引物擴(kuò)不出來，后來還是現(xiàn)在保守序列那里設(shè)計(jì)特異性引物，然后做了RACE。 |
2樓2013-05-02 10:04:37
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