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飄雪3889木蟲 (小有名氣)
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[求助]
求教PCR引物設(shè)計的相關(guān)問題
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要設(shè)計簡并引物，求教各位的經(jīng)驗 實驗?zāi)康氖且獜哪痴婧宋⑸镏姓业矫傅幕蛐蛄校倏寺”磉_。這個酶的基因序列未知，打算從其他物種里面的同種酶來設(shè)計簡并引物。在選擇上，是必須要從親緣關(guān)系很近的物種找起嗎？我這個酶所具有的催化效果，在真核微生物里面報道得不多，植物里面倒是很多見。另外，有哪些公司是專業(yè)設(shè)計這個的，麻煩大家多告訴我一下。 |
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飄雪3889
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4樓2013-05-02 19:32:07
【答案】應(yīng)助回帖
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1，找到親緣關(guān)系較近的其他真核生物（盡量多找） 2，去NCBI上查找這些真核生物，看看有沒有你所需酶的基因序列 3，拿到這些真核生物酶的基因序列，在DNAMAN上比對，對照簡并表，設(shè)計引物。 不過我以前做的片段太長了，簡并引物擴不出來，后來還是現(xiàn)在保守序列那里設(shè)計特異性引物，然后做了RACE。 |
2樓2013-05-02 10:04:37
dafeizizhu
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【答案】應(yīng)助回帖
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| 想要那到一個基因的序列，大多數(shù)情況是用RACE，想要通過一次PCR就得到，那RACE技術(shù)就可以退出了。在保守區(qū)設(shè)計簡并引物，如上樓所述就行，要有多對，引物越多機會越大，5-6對挺好。買個takara RACE就行了。前提是要有好的RNA。 |
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3樓2013-05-02 10:25:51
dafeizizhu
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5樓2013-05-07 15:46:11
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