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hecuie1118鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
PCR電泳總是出現(xiàn)雜帶，該怎么處理？
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最近在做銅綠假單胞菌的oprD基因的分析，擴增之后跑電泳出現(xiàn)了目的條帶，但是總是會出現(xiàn)其他的條帶，少的有一條，多的有好幾條，改了幾次退火溫度也不行，用降落PCR做65-55℃也不行，反而雜帶更多了，圖如下，請教各位大俠該怎么辦呢，要換引物嗎？ 1、2圖最左側(cè)為Marker，從下到上為2000,1000,750,500,250,200,100bp。目的基因為1332bp，往右依次是PAO1，ATCC27853兩個質(zhì)控菌株，然后待測的菌株。總是出現(xiàn)雜帶。 3圖為不同的退火溫度，59度。60度及62度。 參數(shù)為 98℃ 5min 95℃ 40S 58℃ 40s 30個循環(huán) 72℃ 90s 72℃ 10min 1.jpg 2.jpg 3.jpg |
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llm151789
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