版塊導(dǎo)航: 正在加載中...

登錄注冊

應(yīng)《網(wǎng)絡(luò)安全法》要求，自2017年10月1日起，未進(jìn)行實(shí)名認(rèn)證將不得使用互聯(lián)網(wǎng)跟帖服務(wù)。為保障您的帳號能夠正常使用，請盡快對帳號進(jìn)行手機(jī)號驗(yàn)證，感謝您的理解與支持！

24小時(shí)熱門版塊排行榜

北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

返回列表

spritfood

新蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 10.5
帖子: 12
在線: 7.2小時(shí)
蟲號: 1821921
注冊: 2012-05-17
專業(yè): 畜牧學(xué)

[求助] 求助單酶切插入基因片段問題

我現(xiàn)在要改造一個(gè)載體pHT43（8050bp），在KpnI單酶切位點(diǎn)插入一段820bp的序列，遇到了一些問題。過程就是把載體和基因片段都KpnI單酶切之后，載體做了去磷酸，T4連接之后轉(zhuǎn)化DH5α大腸感受態(tài)，然后結(jié)果發(fā)現(xiàn)插入片段的引物做菌液鑒定是陽性，但是酶切之后發(fā)現(xiàn)一個(gè)正確的目的條帶和一個(gè)比原pHT43質(zhì)粒小了很多的載體片段，不知道什么原因。
后面有嘗試過載體不做去磷酸，都是一樣的結(jié)果，就是連接之后載體片段變小了，有高人支招么

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有216人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)
留學(xué)--博士招生已經(jīng)有16人回復(fù)
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限已經(jīng)有4人回復(fù)
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑已經(jīng)有0人回復(fù)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:

目的基因片段膠回收后酶切，然后再跑膠后發(fā)現(xiàn)條帶很弱，怎么改進(jìn)（求助）已經(jīng)有8人回復(fù)
PET-30a 雙酶切已經(jīng)有4人回復(fù)
HInd III EcoR I雙酶切問題已經(jīng)有14人回復(fù)
單酶切連接轉(zhuǎn)化，感受態(tài)的問題？！已經(jīng)有11人回復(fù)
基因工程課程小結(jié) 已經(jīng)有20人回復(fù)
單酶切連接的問題已經(jīng)有4人回復(fù)
連接后轉(zhuǎn)化子PCR出現(xiàn)非特異性的條帶已經(jīng)有10人回復(fù)
單酶切，酶連之后驗(yàn)證問題已經(jīng)有6人回復(fù)
【求助/交流】單酶切酶和DNA的比例，體系大小的問題已經(jīng)有14人回復(fù)
【求助/交流】基因插入質(zhì)粒敲除，為什么質(zhì)粒有正向插入和反向插入呢已經(jīng)有7人回復(fù)
【求助/交流】大家?guī)兔匆粡堧娪緢D 已經(jīng)有11人回復(fù)
【求助/交流】連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化后菌落PCR正確，提取的質(zhì)粒卻比空質(zhì)粒還小？已經(jīng)有4人回復(fù)
【求助/交流】酶切連接后的分子大小問題已經(jīng)有12人回復(fù)
【求助/交流】關(guān)于酶切產(chǎn)物連接的一點(diǎn)問題已經(jīng)有13人回復(fù)
【求助/交流】酶切位點(diǎn)重合了的兩個(gè)酶的酶切問題已經(jīng)有13人回復(fù)
【求助/交流】酶切后無任何條帶是什么原因？已經(jīng)有8人回復(fù)
【求助/交流】大片段連接轉(zhuǎn)化成功與否問題已經(jīng)有11人回復(fù)
【求助/交流】單酶切連接的克隆急…… 已經(jīng)有10人回復(fù)
【求助/交流】在構(gòu)建基因表達(dá)載體的時(shí)候什么時(shí)候需要人為地在上面加上啟動子？已經(jīng)有6人回復(fù)
【求助/交流】單酶切載體竟然沒切開，尋求原因？？已經(jīng)有15人回復(fù)

1樓 2013-05-09 16:30:58

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

cicelyzh

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)

MolEPI: 10
應(yīng)助: 1662 (講師)
金幣: 8693.8
紅花: 72
帖子: 3516
在線: 456小時(shí)
蟲號: 1614001
注冊: 2012-02-13
專業(yè): 生物化學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 贈人玫瑰手有余香，分子生物版塊期待你的更多精彩。 2013-05-10 08:33:54

你確定載體只有一個(gè)kpnI位點(diǎn)嗎？酶切后是否跑膠檢查酶切條帶？

贊一下

回復(fù)此樓

2樓2013-05-10 01:25:49

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn) 我要訂閱樓主 spritfood 的主題更新