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jack6335鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[求助]
蛋白形成多聚體
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大家好,我在做western Blot時發(fā)現(xiàn)實(shí)際大小是55kDa的蛋白(很多文獻(xiàn)上和抗體說明書上都是這么大)顯色出來居然大于110kDa,我是將蛋白在沸水中煮5min后跑的SDS-PAGE,怎么會形成多聚體呢?求解答!![]() |

鐵桿木蟲 (正式寫手)

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
金蟲 (小有名氣)
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不知你的蛋白里有木有二硫鍵!! 我懷疑是共價(jià)鍵形成的二聚體!例如二硫鍵。∷阅悴荒芎芎玫拇蜷_二硫鍵!原因有: 1.你的還原劑的還原強(qiáng)度不夠!需要你增加還原劑的量,或改變還原劑的種類!巰基乙醇的還原性<DTT的還原性 2.如果你用的是DTT,我猜可能是時間長了,DTT已經(jīng)不能起作用了!DTT的穩(wěn)定性比較差,容易被氧化,建議你使用TCEP,TCEP的穩(wěn)定性>DTT穩(wěn)定性! 3.可能是你的二硫鍵之間相互作用力太大,導(dǎo)致5min并不能使它打開!建議你煮沸的時間長點(diǎn),煮個10min,或者更長,我曾今有個蛋白就煮沸了30min! 就這么多吧! 希望以上意見對你有點(diǎn)用! |

銀蟲 (正式寫手)
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