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jack6335鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[求助]
蛋白形成多聚體
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大家好，我在做western Blot時(shí)發(fā)現(xiàn)實(shí)際大小是55kDa的蛋白（很多文獻(xiàn)上和抗體說明書上都是這么大）顯色出來居然大于110kDa，我是將蛋白在沸水中煮5min后跑的SDS-PAGE，怎么會(huì)形成多聚體呢？求解答！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+3, 謝謝詳細(xì)的分析 2013-05-15 01:03:31
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+3, 謝謝詳細(xì)的分析 2013-05-15 01:03:31
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不知你的蛋白里有木有二硫鍵�。�！ 我懷疑是共價(jià)鍵形成的二聚體！例如二硫鍵��！所以你不能很好的打開二硫鍵！原因有： 1.你的還原劑的還原強(qiáng)度不夠！需要你增加還原劑的量，或改變還原劑的種類！巰基乙醇的還原性<DTT的還原性 2.如果你用的是DTT，我猜可能是時(shí)間長(zhǎng)了，DTT已經(jīng)不能起作用了！DTT的穩(wěn)定性比較差，容易被氧化，建議你使用TCEP，TCEP的穩(wěn)定性>DTT穩(wěn)定性！ 3.可能是你的二硫鍵之間相互作用力太大，導(dǎo)致5min并不能使它打開！建議你煮沸的時(shí)間長(zhǎng)點(diǎn)，煮個(gè)10min，或者更長(zhǎng)，我曾今有個(gè)蛋白就煮沸了30min！ 就這么多吧！ 希望以上意見對(duì)你有點(diǎn)用！ |
4樓2013-05-14 18:35:54
cicelyzh
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2樓2013-05-14 12:53:52
jack6335
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3樓2013-05-14 13:54:47
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5樓2013-05-14 18:54:06
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