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北京石油化工學院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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yangxijia

新蟲 (初入文壇)

應助: 0 (幼兒園)
金幣: 16
帖子: 9
在線: 3.7小時
蟲號: 2414179
注冊: 2013-04-12
專業(yè): 發(fā)育生物學

[求助] 『求助』酶活測定遇到困難

在次向各位牛人求助：
最近在做一個脂酰CoA合成酶的酶活分析，體系是60 mM PBS containing 10 mM MgCl2, 5 mM ATP, 2.5 mM DTT, 1 mM CoASH, 0.1 mM fatty acid和2ug的重組蛋白，30度反應1h；蛋白只有一個his tag，理論上不會對活性有太大影響，但用LC—MS根本測不到一點產(chǎn)物，分析了好久也找不到原因，真的是走投無路啊。由于CoA是水溶的，所以不知道里面的鹽離子會不會產(chǎn)生影響，不知道有什么好的抽提萃取方式。

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1樓 2013-05-22 22:15:56

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yyy0305

至尊木蟲 (著名寫手)

BioEPI: 2
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注冊: 2012-01-10
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專業(yè): 生物技術藥物

【答案】應助回帖

沒產(chǎn)物，樓主的反應沒成功啊。分析原因可能有這幾個：
1.酶本身的問題，是不是你酶的量或者活力太差
2.配置的buffer里面是否有其他陽離子干擾，和Mg離子產(chǎn)生競爭性抑制
3.建議緩沖液由PBS換成Tris-Hcl 試試

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2樓2013-05-31 00:07:27

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