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zisejiguan

銅蟲 (小有名氣)

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[求助] 新手求助：原核表達(dá)的問題

最近剛開始做原核表達(dá)，我有一些疑惑，希望高手們幫幫忙
1.原核表達(dá)活化菌的時(shí)候，是過夜培養(yǎng)然后接大瓶接著搖到OD值0.6，還是試管里搖到OD值0.6，放四度冰箱第二天接大瓶。還有看到有人說接大瓶的時(shí)候要離心收菌接，有必要嗎？
2.表達(dá)的時(shí)候是形成包涵體好還是可溶性的蛋白好？
3.我用的pET30a（+）轉(zhuǎn)化的BL21（DE3），但是有的蛋白表達(dá)不出來，表達(dá)出來的蛋白含量也很低，這個(gè)過程中是不是有什么需要注意的地方啊。
郁悶死了

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1樓 2013-06-11 16:18:25

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lxj341401

至尊木蟲 (著名寫手)

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zisejiguan: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-06-12 16:15:28

1、過夜培養(yǎng)然后接大瓶接著搖到OD值0.6左右加誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)表達(dá)；
2、不能說哪個(gè)一定好，各有各的優(yōu)勢(shì)，但一般是可溶性的蛋白好，可以直接做活性等。
3、每個(gè)表達(dá)系統(tǒng)都有自己能表達(dá)和不能表達(dá)的蛋白，這個(gè)很正常，比如蛋白有毒性，表達(dá)量就低甚至檢測(cè)不到表達(dá)。同一個(gè)表達(dá)系統(tǒng)對(duì)不同的蛋白表達(dá)條件還是有差異的，需要優(yōu)化。如果優(yōu)化后也不好，換其他表達(dá)系統(tǒng)試試。

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回復(fù)此樓

2樓2013-06-11 17:37:05

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