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mmzhang新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
載體構(gòu)建問(wèn)題
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目前在構(gòu)建基因表達(dá)載體，遇到如下問(wèn)題，希望大蝦們能夠幫幫忙。 構(gòu)建了某基因的超表達(dá)載體（用的是pCAMBIA1300改造后的載體），經(jīng)測(cè)序后序列沒(méi)有問(wèn)題，但是轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌后卻沒(méi)有克隆，已經(jīng)重復(fù)做了幾次，都是同樣的結(jié)果。以我目前的經(jīng)驗(yàn)，實(shí)在是不知道什么原因了。 PS: 1、該基因在酵母表達(dá)載體中正常表達(dá)；2、其它基因用的也是pCAMBIA1300改造后的載體，轉(zhuǎn)化后能夠正常生長(zhǎng)。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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mmzhang: 金幣+2 2013-06-16 18:32:54
| 把空載和重組質(zhì)粒同時(shí)轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌后看結(jié)果。 |
3樓2013-06-14 12:01:54
玲瓏琉璃
銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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mmzhang: 金幣+2 2013-06-16 18:32:50
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你再借個(gè)質(zhì)粒做陽(yáng)性對(duì)照，一起轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌吧，看是不是農(nóng)桿菌感受態(tài)的問(wèn)題。 或者你從別的實(shí)驗(yàn)室借個(gè)農(nóng)桿菌感受態(tài)，一起轉(zhuǎn)了，如果有，給你省點(diǎn)時(shí)間。 |
2樓2013-06-14 11:48:57
mmzhang
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4樓2013-06-14 12:03:50
玲瓏琉璃
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5樓2013-06-14 19:01:48
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