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糖泡泡金蟲 (正式寫手)
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[求助]
western blot中古怪的非特異性條帶
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最近做western blot總受一些非特異性條帶的干擾，雖查了好多資料，一一排查，還是沒有解決。想問下我的蛋白經過反應后是溶解在酸性溶液里（pH 4.0-6.0）,直接加入loading buffer煮沸后電泳轉膜顯色，酸性溶液中的蛋白直接western blot會是非特異性顯色的來源嗎？大家還有什么好的建議針對我的非特異性。 Ps，發(fā)現從背面看我的特異性條帶特別明顯，非特異性條帶不怎么清楚。但正面看膜的話特異性條帶模糊，非特異性條帶特別濃，這又是什么原因？ Help!  [ Last edited by 1949stone on 2013-7-5 at 15:59 ] |
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糖泡泡: 金幣+3 2013-07-05 14:07:40
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正面背面的問題，難道你的轉膜有穿孔現象？可以換張另一批次的PVDF膜再做次看看， 雜帶問題一般說來，先稀釋樣品，做個梯度，如果還有雜帶，稀釋一抗，做梯度，試試如何，再不行，投訴抗體公司，不是你的錯 |
2樓2013-06-28 19:39:56
cicelyzh
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【答案】應助回帖
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我沒有遇到過這種情況。因為western是半定量的，應該是蛋白量越多條帶越深。不知道你做western的目的是什么，既然目標蛋白和非特異條帶在膠上位置不同，應該可以區(qū)分，這種結果也算是可以接受的吧。我?guī)缀醪挥肣Q的。你可以發(fā)email給我：cicelyzhang@hotmail.com |
10樓2013-07-06 13:42:57
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