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糖泡泡金蟲 (正式寫手)
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[求助]
western blot中古怪的非特異性條帶
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最近做western blot總受一些非特異性條帶的干擾，雖查了好多資料，一一排查，還是沒(méi)有解決。想問(wèn)下我的蛋白經(jīng)過(guò)反應(yīng)后是溶解在酸性溶液里（pH 4.0-6.0）,直接加入loading buffer煮沸后電泳轉(zhuǎn)膜顯色，酸性溶液中的蛋白直接western blot會(huì)是非特異性顯色的來(lái)源嗎？大家還有什么好的建議針對(duì)我的非特異性。 Ps，發(fā)現(xiàn)從背面看我的特異性條帶特別明顯，非特異性條帶不怎么清楚。但正面看膜的話特異性條帶模糊，非特異性條帶特別濃，這又是什么原因？ Help!  [ Last edited by 1949stone on 2013-7-5 at 15:59 ] |
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糖泡泡
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正面背面的問(wèn)題，難道你的轉(zhuǎn)膜有穿孔現(xiàn)象？可以換張另一批次的PVDF膜再做次看看， 雜帶問(wèn)題一般說(shuō)來(lái)，先稀釋樣品，做個(gè)梯度，如果還有雜帶，稀釋一抗，做梯度，試試如何，再不行，投訴抗體公司，不是你的錯(cuò) |
2樓2013-06-28 19:39:56
cicelyzh
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