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糖泡泡金蟲 (正式寫手)
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[求助]
western blot中古怪的非特異性條帶
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最近做western blot總受一些非特異性條帶的干擾,雖查了好多資料,一一排查,還是沒有解決。想問下我的蛋白經(jīng)過反應(yīng)后是溶解在酸性溶液里(pH 4.0-6.0),直接加入loading buffer煮沸后電泳轉(zhuǎn)膜顯色,酸性溶液中的蛋白直接western blot會(huì)是非特異性顯色的來源嗎?大家還有什么好的建議針對(duì)我的非特異性。 Ps,發(fā)現(xiàn)從背面看我的特異性條帶特別明顯,非特異性條帶不怎么清楚。但正面看膜的話特異性條帶模糊,非特異性條帶特別濃,這又是什么原因? Help! ![]() [ Last edited by 1949stone on 2013-7-5 at 15:59 ] |
金蟲 (正式寫手)
至尊木蟲 (正式寫手)
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正面背面的問題,難道你的轉(zhuǎn)膜有穿孔現(xiàn)象?可以換張另一批次的PVDF膜再做次看看, 雜帶問題一般說來,先稀釋樣品,做個(gè)梯度,如果還有雜帶,稀釋一抗,做梯度,試試如何,再不行,投訴抗體公司,不是你的錯(cuò) |

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
金蟲 (正式寫手)
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