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hua_geduo

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[求助] 細(xì)胞培養(yǎng)的血清問(wèn)題

細(xì)胞培養(yǎng)的血清500ml，沒(méi)有完全融化我就把已經(jīng)融化的部分進(jìn)行了分裝,拿來(lái)使用，是不是這樣的血清不均勻?這樣會(huì)不會(huì)對(duì)細(xì)胞有影響？這幾天發(fā)現(xiàn)細(xì)胞總會(huì)脫落，會(huì)不會(huì)跟這個(gè)有關(guān)？

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1樓 2013-06-29 09:31:39

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

hua_geduo

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引用回帖:

3樓: Originally posted by 透明的玻璃杯 at 2013-06-30 21:20:25
確定一下，你說(shuō)的細(xì)胞脫落培養(yǎng)表面長(zhǎng)滿了沒(méi)有，是什么細(xì)胞？當(dāng)然你這么偷懶的遇到問(wèn)題也不奇怪。

我沒(méi)有偷懶，可能我沒(méi)有說(shuō)清楚，問(wèn)題已解決，謝謝

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4樓2013-07-01 20:56:10

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myprayer

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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kx444555: 金幣+5, 鼓勵(lì)交流 2013-06-30 16:21:41
hua_geduo: 金幣+3, ★有幫助 2013-07-01 20:55:18

這個(gè)是細(xì)胞培養(yǎng)的一般方法，大概就是這個(gè)流程吧
具體的你的問(wèn)題我再給你說(shuō)一下
培養(yǎng)基的配置那DMEM為例
先是溶解相應(yīng)的碳酸氫鈉，然后加入培養(yǎng)基，等充分溶解之后過(guò)濾，過(guò)濾最好都到無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行，
PVDF 0.22um的材質(zhì)過(guò)濾器
然后將你所用的血清加入到已經(jīng)過(guò)濾好的培養(yǎng)基中，稍微輕輕的搖晃讓其均勻，然后分裝在50ML的離心管中這步你看實(shí)驗(yàn)室需求了，這樣分裝的目的能夠減少整體污染。
配置培養(yǎng)基大概就是這樣子的。

再來(lái)說(shuō)說(shuō)你的問(wèn)題
你說(shuō)細(xì)胞脫落，是細(xì)胞貼壁貼的不好嗎？這個(gè)要看你具體是什么細(xì)胞了。
下面給你說(shuō)的是細(xì)胞培養(yǎng)的大概步驟
感覺你說(shuō)的問(wèn)題就是沒(méi)有搞清楚流程，沒(méi)見過(guò)直接用血清那樣子用的

1.玻璃吸管和玻璃培養(yǎng)瓶的消毒:1)高壓蒸汽滅菌15分鐘以上;2)干烤消毒140度2小時(shí)以上;
   2.無(wú)菌工作臺(tái)先清洗后用75%酒精擦拭干凈,紫外線照射40分鐘以上;各種培養(yǎng)板照射3小時(shí)以上;
   3.培養(yǎng)基(pH7.2)和血清配制好后要做無(wú)菌試驗(yàn):將血清按10%加入培養(yǎng)基內(nèi),用無(wú)菌的玻璃離心管或玻璃瓶取完全培養(yǎng)基5-10ml置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2-3天,肉眼見無(wú)渾濁或沉淀等異物.分裝后置-20度保存;
   4.消化液(pH7.8)或其它加入液,應(yīng)用高壓蒸汽滅菌或一次性無(wú)菌濾器過(guò)濾除菌,分裝成支置-20度保存;
   5.培養(yǎng)箱應(yīng)先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外線的應(yīng)照射1小時(shí)以上,如有高溫滅菌的應(yīng)按程序來(lái)菌).至少每月一次.
   6.進(jìn)入操作時(shí)應(yīng)注意先清洗雙手及手腕,然后用75%酒精擦拭,操作時(shí)注意無(wú)菌臺(tái)內(nèi)空間層次.手及物品不要在暴露的瓶口上方來(lái)往,如果數(shù)量較多,培養(yǎng)瓶應(yīng)放在與酒精燈平行地方便于操作,瓶與瓶之間應(yīng)相隔一定的距離,開瓶(蓋)時(shí)應(yīng)先用75%酒精反復(fù)擦拭或用燈燒,開開后應(yīng)用燈先燒口,然后燒蓋.用完后同樣操作.整個(gè)操作過(guò)程盡量在無(wú)菌臺(tái)靠里面一點(diǎn).
  復(fù)蘇:
1. 應(yīng)遵守慢凍快融的原則.先將水溫鍋調(diào)至37-37.5度,取出凍存的細(xì)胞迅速放入后交細(xì)胞面浸至水面以下不斷搖動(dòng)至融化.
2.          2.在無(wú)菌臺(tái)內(nèi)將完全培養(yǎng)基加入50ml的小培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),約5ml左右,然后用無(wú)菌吸管從凍存管內(nèi)取出細(xì)胞,置培養(yǎng)并內(nèi)輕輕搖晃,使細(xì)胞均勻后置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng).
傳代:

1.貼壁細(xì)胞:
      對(duì)于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強(qiáng)度減弱.50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約0.6ml,按此比例進(jìn)行消化,(根據(jù)配制強(qiáng)度經(jīng)驗(yàn)),晃動(dòng)使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2分鐘,鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動(dòng)瓶底使細(xì)胞全部脫落,加入2-3ml完全培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細(xì)胞基本成單個(gè)懸浮,然后分置其它無(wú)菌培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入完全培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn).
懸浮細(xì)胞:
      一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心500rpm,5min后加入完全培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng).

[ Last edited by myprayer on 2013-6-30 at 16:02 ]

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2樓2013-06-30 16:00:20

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透明的玻璃杯

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皇帝誕生地

3樓2013-06-30 21:20:25

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