 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (3069)
- >導(dǎo)師招生 (293)
- >考研 (263)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (126)
- >文獻(xiàn)求助 (96)
- >基金申請(qǐng) (62)
- >休閑灌水 (58)
- >教師之家 (42)
- >考博 (40)
- >招聘信息布告欄 (36)
- >碩博家園 (30)
- >論文道賀祈福 (27)
- >論文投稿 (24)
- >無(wú)機(jī)/物化 (22)
- >留學(xué)生活 (19)
- >博后之家 (18)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1501 | 回復(fù): 9 | ||
[求助]
菜鳥(niǎo)求助：PCR擴(kuò)增和擴(kuò)增產(chǎn)物的克隆？？
|
|
書(shū)上如是說(shuō)：在許多研究中,需要將PCR產(chǎn)物克隆,以獲得目的DNA片段。 我不明白的地方是，要獲得目的DNA片段就是通過(guò)PCR。PCR的產(chǎn)物就是DNA片段，要將產(chǎn)物克隆就是要獲得更多的片段，繼續(xù)PCR不就行了么？？ 我理解的是PCR的產(chǎn)物中只有兩條模板鏈?zhǔn)情L(zhǎng)的，其他的都是短的對(duì)嗎？可以P出與模板鏈一樣長(zhǎng)的鏈嗎？？ 菜鳥(niǎo)問(wèn)題，大蝦見(jiàn)笑 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有248人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線(xiàn)
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 求助師兄師姐~有關(guān)于巢式PCR的問(wèn)題~~help
已經(jīng)有11人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物不做純化和膠回收，直接TA克隆可以嗎？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 關(guān)于克隆技術(shù)——pcr產(chǎn)物測(cè)序問(wèn)題
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 5kb大片段PCR擴(kuò)增求助
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 求助：PCR擴(kuò)增片段測(cè)序結(jié)果引物中間多出150bp的片段
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 熒光定量PCR擴(kuò)增效率怎么做？？？？我要被逼瘋了
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 天根公司的Long Taq DNA Polymerase的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物是平末端還是帶A尾巴？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- pcr產(chǎn)物測(cè)序和克隆之后重組質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果一樣嗎？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- DGGE膠回收問(wèn)題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 真菌ITS序列PCR擴(kuò)增 求助
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】分子克隆后M13引物PCR擴(kuò)增
已經(jīng)有32人回復(fù)
- 【求助/交流】菌落PCR問(wèn)題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】為什么PCR擴(kuò)增產(chǎn)物片段長(zhǎng)度比設(shè)計(jì)時(shí)的要長(zhǎng)很多？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR產(chǎn)物連接請(qǐng)教！
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR陰性對(duì)照總有擴(kuò)增產(chǎn)物 都有哪些可能？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR 的原理是啥啊
已經(jīng)有20人回復(fù)
cicelyzh
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線(xiàn): 456小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1614001
- 注冊(cè): 2012-02-13
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
2樓2013-07-03 00:28:19
3樓2013-07-03 02:02:01
4樓2013-07-04 13:54:51
nxguojunxian
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 44.5
- 帖子: 14
- 在線(xiàn): 10.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 925592
- 注冊(cè): 2009-12-11
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)新蟲(chóng)交流 2013-07-09 13:06:06
cly2810: 金幣+2, ★★★★★最佳答案 2013-07-09 16:42:41
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)新蟲(chóng)交流 2013-07-09 13:06:06
cly2810: 金幣+2, ★★★★★最佳答案 2013-07-09 16:42:41
|
關(guān)于你的這段話(huà)的2個(gè)問(wèn)題： 1 PCR就是對(duì)目的DNA的富集過(guò)程。如果只想做多態(tài)性研究就不必做克隆，但以下情況需要你做克隆：a:要測(cè)序的目的片段較短，需要連到載體克隆后測(cè)序；b:認(rèn)為目的基因內(nèi)存在雜合位點(diǎn)，堿基的缺失和突變等情況；c:下一步試驗(yàn)的需要，比如需要對(duì)目的基因進(jìn)行功能研究 ; 2 既然PCR是目的DNA富集的過(guò)程，經(jīng)過(guò)30輪左右的指數(shù)定增過(guò)程，最終PCR產(chǎn)物中都是您的目的DNA大小的DNA片段。 |
5樓2013-07-08 16:24:52
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-07-09 13:06:15
cly2810: 金幣+1, ★有幫助 2013-07-09 16:42:51
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-07-09 13:06:15
cly2810: 金幣+1, ★有幫助 2013-07-09 16:42:51
|
"我理解的是PCR的產(chǎn)物中只有兩條模板鏈?zhǔn)情L(zhǎng)的，其他的都是短的對(duì)嗎？可以P出與模板鏈一樣長(zhǎng)的鏈嗎？？" 除了模板還是原來(lái)那么長(zhǎng)（排除在反應(yīng)中被降解的理想情況下），還會(huì)以線(xiàn)性增長(zhǎng)擴(kuò)增一頭是引物，一頭是一直延伸超過(guò)目的片段長(zhǎng)度的，如果延伸溫度足夠長(zhǎng)，會(huì)一直延伸到比較復(fù)雜的結(jié)構(gòu)為止，然后是以指數(shù)增長(zhǎng)擴(kuò)增的兩頭是引物的目的產(chǎn)物，估計(jì)就是你說(shuō)的短的產(chǎn)物。 一般的PCR用聚合酶不能進(jìn)行超長(zhǎng)片段擴(kuò)增，不過(guò)，如果模板本身是PCR產(chǎn)物，再次PCR是有可能擴(kuò)增到模板那么長(zhǎng)的，按理論說(shuō)是完全有可能，但實(shí)際試驗(yàn)操作時(shí)，還是要進(jìn)行摸索，主要是PCR產(chǎn)物非特異性擴(kuò)增的條帶以及其他原因抑制擴(kuò)增，通常需要做不同稀釋倍數(shù)的摸索。 |
6樓2013-07-09 08:05:23
7樓2013-10-10 16:09:26
8樓2013-10-10 16:10:05
9樓2013-10-10 16:10:43
【答案】應(yīng)助回帖
|
影響PCR的因素很多，而且擴(kuò)增的過(guò)程有可能會(huì)發(fā)生突變，而克隆得到的質(zhì)粒，在大腸桿菌內(nèi)擴(kuò)增保真率比PCR更高，質(zhì)粒復(fù)制再提取質(zhì)粒獲得完全相同的片段要比直接PCR來(lái)得容易也更有保證。而且PCR會(huì)有一定的非特異帶非目的帶擴(kuò)增出來(lái)，如果得到的片段需要進(jìn)行克隆進(jìn)行表達(dá)或其他功能研究，就需要在克隆后鑒定是否目的帶。 如果只是檢測(cè)是否有預(yù)期的片段，直接PCR就可以了，更常見(jiàn)的是實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)，不用再進(jìn)行克隆也能達(dá)到某些目的，比如mRNA的轉(zhuǎn)錄水平等。 |
10樓2013-10-11 18:45:47
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 cly2810 的主題更新
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +4 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +5 | 煙火先于春 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +6 | 孔志浩 2026-03-12 | 11/550 |
|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +4 | 梨花珞晚風(fēng) 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)]
今年的國(guó)基金是打分制嗎？
 50+3
|
zhanghaozhu 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿211 0703方向310分求調(diào)劑 +3 | 努力奮斗112 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +10 | 小樓。 2026-03-12 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 中科院材料273求調(diào)劑 +4 | yzydy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 290分有科研經(jīng)歷，論文在投 +7 | 膩膩gk 2026-03-14 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 255求調(diào)劑 +3 | 李嘉慧， 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑 +3 | ?醬給調(diào)劑跪了 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +6 | 邱gl 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求材料調(diào)劑 085600英一數(shù)二總分302 前三科235 精通機(jī)器學(xué)習(xí) 一志愿哈工大 +4 | 林yaxin 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 315求調(diào)劑 +9 | 小羊小羊_ 2026-03-11 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +7 | 綠豆芹菜湯 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求b區(qū)學(xué)校調(diào)劑 +3 | 周56 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +8 | 困于星晨 2026-03-12 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 工科調(diào)劑 +4 | Jiang191123！ 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考博] 福州大學(xué)楊黃浩課題組招收2026年專(zhuān)業(yè)學(xué)位博士研究生，2026.03.20截止 +3 | Xiangyu_ou 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑（食品/專(zhuān)碩） +3 | xc321 2026-03-12 | 6/300 |
|