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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 化學化工區(qū) » 分析 » 色譜質譜 » LC-MS-MS如何用內內標定量分析？
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wmy110430金蟲 (小有名氣)
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[求助]
LC-MS-MS如何用內內標定量分析？
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本人現在用三重四級桿LCMSMS定量分析目標物，但是沒有標準品。老師讓用內標法進行相對定量，內標物已選好，老師只說要我保證在前處理后、進樣測試前，在待測樣品中加入定量的內標物，然后進行測試。剩下的我就不太明白定量分析時，內標法該具體怎么操作呢？ 看資料說用內標法做色話定量分析時，先配制一定重量比的待測組分和內標樣品的混合物做色譜分析，測量峰面積，做重量比和面積比的關系曲線，此曲線即為標準曲線，如果這樣的話，沒有標準品怎么辦啊？？？？ 本人是菜鳥，不明白，麻煩各位大俠啦，求解答，萬分感謝！ |
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babyfast
金蟲 (正式寫手)
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4樓2013-07-11 22:24:26
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數 +1
wmy110430: 金幣+20, 謝謝你哦 2013-07-14 21:45:41
感謝參與，應助指數 +1
wmy110430: 金幣+20, 謝謝你哦 2013-07-14 21:45:41
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1、內標法進行定量分析，同樣需要待測物標準品，這一點文獻講述的與你的理解都是正確的。如果沒有待測物標準品就不能準確測量其含量，因為無法繪制標準曲線。 2、沒有待測物標準品不能準確測量其含量，但可以通過加入內標的方法測量待測物的相對含量，可以比較待測物在各樣品中的多少及相差倍數。你們老師可能要得到的是這個結果。 3、用lc-ms-ms做定量一般都采用MRM的掃描方式，你沒有待測物標準品，就無法建立和優(yōu)化MRM掃描的質譜參數，這樣你只能使用FULL SCAN或SIM的掃描方法。沒有待測物標準品，你也無法準確得到待測物在LC上的保留時間，如果你的樣品中有與待測物相似質量數的化合物，你得到的色譜峰就不會很純凈，會對你判定那個是你的待測化合物產生干擾。 |
2樓2013-07-11 09:35:25
musicmelody
銀蟲 (小有名氣)
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3樓2013-07-11 12:37:00
wmy110430
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wmy110430: 回帖置頂 2013-07-14 22:19:49
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謝謝你的回答。我現在沒有標準品，就只用面積相對定量。然后我選用LCMSMS的SIM模式（我的樣品雜質比較少，選擇同位素豐度為100%的分子量，上下增減0.2 老師讓我這么做）。我考察因素導致的量的改變比較微量，選擇一種物質為回收率指示物（反應液前處理前加入）， 一種物質為內標物（老師要我保證在前處理后、液相小瓶中進樣測試前，在待測樣品中加入定量的內標物，然后進行測試）。 對內標那個步驟，我還是不太明白，老師讓在處理完的樣品進儀器前，統(tǒng)一加入一定質量的內標物，資料說必須還要保證內標響應跟待測目標物差不多，在一個數量級內，所以要通過計算得出內標加入量，這些到底怎么計算的呢？？？？有師兄說老師可能是讓我用內標物起到定待測液體積的作用，不知道理解的對不對耶？？？。。。我又說了一大通，麻煩大俠指教了，O(∩_∩)O謝謝啦 |
5樓2013-07-14 22:16:45
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