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wmy110430金蟲 (小有名氣)
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[求助]
LC-MS-MS如何用內(nèi)內(nèi)標(biāo)定量分析？
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本人現(xiàn)在用三重四級(jí)桿LCMSMS定量分析目標(biāo)物，但是沒有標(biāo)準(zhǔn)品。老師讓用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行相對(duì)定量，內(nèi)標(biāo)物已選好，老師只說要我保證在前處理后、進(jìn)樣測(cè)試前，在待測(cè)樣品中加入定量的內(nèi)標(biāo)物，然后進(jìn)行測(cè)試。剩下的我就不太明白定量分析時(shí)，內(nèi)標(biāo)法該具體怎么操作呢？ 看資料說用內(nèi)標(biāo)法做色話定量分析時(shí)，先配制一定重量比的待測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)樣品的混合物做色譜分析，測(cè)量峰面積，做重量比和面積比的關(guān)系曲線，此曲線即為標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果這樣的話，沒有標(biāo)準(zhǔn)品怎么辦��？？？？ 本人是菜鳥，不明白，麻煩各位大俠啦，求解答，萬分感謝！ |
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wmy110430
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wmy110430: 回帖置頂 2013-07-14 22:19:49
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謝謝你的回答。我現(xiàn)在沒有標(biāo)準(zhǔn)品，就只用面積相對(duì)定量。然后我選用LCMSMS的SIM模式（我的樣品雜質(zhì)比較少，選擇同位素豐度為100%的分子量，上下增減0.2 老師讓我這么做）。我考察因素導(dǎo)致的量的改變比較微量，選擇一種物質(zhì)為回收率指示物（反應(yīng)液前處理前加入）， 一種物質(zhì)為內(nèi)標(biāo)物（老師要我保證在前處理后、液相小瓶中進(jìn)樣測(cè)試前，在待測(cè)樣品中加入定量的內(nèi)標(biāo)物，然后進(jìn)行測(cè)試）。 對(duì)內(nèi)標(biāo)那個(gè)步驟，我還是不太明白，老師讓在處理完的樣品進(jìn)儀器前，統(tǒng)一加入一定質(zhì)量的內(nèi)標(biāo)物，資料說必須還要保證內(nèi)標(biāo)響應(yīng)跟待測(cè)目標(biāo)物差不多，在一個(gè)數(shù)量級(jí)內(nèi)，所以要通過計(jì)算得出內(nèi)標(biāo)加入量，這些到底怎么計(jì)算的呢？？？？有師兄說老師可能是讓我用內(nèi)標(biāo)物起到定待測(cè)液體積的作用，不知道理解的對(duì)不對(duì)耶？？？。。。我又說了一大通，麻煩大俠指教了，O(∩_∩)O謝謝啦 |
5樓2013-07-14 22:16:45
【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wmy110430: 金幣+20, 謝謝你哦 2013-07-14 21:45:41
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wmy110430: 金幣+20, 謝謝你哦 2013-07-14 21:45:41
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1、內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析，同樣需要待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品，這一點(diǎn)文獻(xiàn)講述的與你的理解都是正確的。如果沒有待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品就不能準(zhǔn)確測(cè)量其含量，因?yàn)闊o法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 2、沒有待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品不能準(zhǔn)確測(cè)量其含量，但可以通過加入內(nèi)標(biāo)的方法測(cè)量待測(cè)物的相對(duì)含量，可以比較待測(cè)物在各樣品中的多少及相差倍數(shù)。你們老師可能要得到的是這個(gè)結(jié)果。 3、用lc-ms-ms做定量一般都采用MRM的掃描方式，你沒有待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品，就無法建立和優(yōu)化MRM掃描的質(zhì)譜參數(shù)，這樣你只能使用FULL SCAN或SIM的掃描方法。沒有待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品，你也無法準(zhǔn)確得到待測(cè)物在LC上的保留時(shí)間，如果你的樣品中有與待測(cè)物相似質(zhì)量數(shù)的化合物，你得到的色譜峰就不會(huì)很純凈，會(huì)對(duì)你判定那個(gè)是你的待測(cè)化合物產(chǎn)生干擾。 |
2樓2013-07-11 09:35:25
musicmelody
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3樓2013-07-11 12:37:00
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4樓2013-07-11 22:24:26
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