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冰糖-葫蘆娃鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
實(shí)驗(yàn)要做基因克隆，本人零基礎(chǔ)，真誠(chéng)求助!
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| 本人要克隆鯉魚丙酮酸激酶（PK）的基因，關(guān)于分子生物學(xué)的知識(shí)只知道些皮毛，目前剛學(xué)會(huì)在NCBI上查找基因序列：查到了羅非魚PK的基因組（NT）；羅非魚PK的轉(zhuǎn)錄序列1(XM),和轉(zhuǎn)錄序列2(XM),這倆個(gè)都是mRNA；還有大西洋鮭PK的成熟mRNA序列（NM）。請(qǐng)問(wèn)接下來(lái)該怎么辦？是比查找保守序列進(jìn)行引物設(shè)計(jì)嗎？要不要做RACE？需要提取的是DNA還是總RNA？還是兩者都提�。�......問(wèn)題太多了，有些茫然啊，懇請(qǐng)大神給小弟指點(diǎn)迷津，或者是介紹一點(diǎn)有關(guān)分子生物學(xué)的書籍，小弟感激不盡。 |
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2樓2013-07-18 22:34:08
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3樓2013-07-18 22:45:33
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4樓2013-07-19 08:12:38
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| 比對(duì)相似生物的同一個(gè)基于的保守區(qū)，然后設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物P，然后測(cè)序，是你要的結(jié)果，再做RACE，然后得到基因的全長(zhǎng)序列，找出基因的ORF，然后設(shè)計(jì)全長(zhǎng)引物P，再測(cè)序，確定克隆基因正確。你搜的其他物種是RNA序列你就提RNA，反之，提DNA。別茫然，不會(huì)什么，去學(xué)就是了。分子克隆第三版可以看，上面所有分子方面的試驗(yàn)幾乎全部都有，方法可以直接使用。 |
5樓2013-07-19 08:44:49
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6樓2013-07-19 11:52:38
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