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wklinyi新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助——構(gòu)建載體
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各位大蝦。我想向pYES2(5.9kb)里插入一段1.5kb的基因。基因已經(jīng)做了TA克隆。pYES2用hindIII和xba I酶切，基因用hind III和spe I酶切（xba I和spe I切出的片斷互補(bǔ)） 膠回收用promega�；厥諠舛却蠹s為20ng/ul。然后連接時，TAKARA的T4和ligation Mix,NEB的T4都試過。連接比例1：4，1：7，1：10都試過，就是不長啊。 有一次長出來幾個，菌落PCR也P出條帶了，但再提質(zhì)粒時就什么都沒。從那以后就一個菌落都沒。 小弟都做了兩個多月了，已經(jīng)是厭學(xué)的情緒了。哪位大蝦指點(diǎn)一下是哪的問題啊。 [ Last edited by 1949stone on 2013-7-23 at 10:27 ] |
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cicelyzh
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4樓2013-07-24 00:35:21
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