 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3898 | 回復(fù): 4 | |||
...山雨新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
EMSA實(shí)驗(yàn)問(wèn)題
|
|
最近在做EMSA實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)教一個(gè)問(wèn)題：做這個(gè)實(shí)驗(yàn)跑非變性膠時(shí)為啥不用考慮蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)呢，無(wú)論是酸性蛋白還是堿性蛋白都是用pH8.3的緩沖液？ [ Last edited by silicare on 2014-2-26 at 16:32 ] |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 生物科學(xué)系列 |
» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有247人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 關(guān)于Hs tag 蛋白純化后蛋白不純的問(wèn)題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 請(qǐng)教大家有關(guān)找靶點(diǎn)的一個(gè)問(wèn)題，謝謝你們了~~~
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 怎么確定一種物質(zhì)是某一受體的配體？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 請(qǐng)教各位前輩關(guān)于EMSA（gel shift）的問(wèn)題！
已經(jīng)有6人回復(fù)
- EMSA非放射性地辛高標(biāo)記
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 求助，Western-Blot轉(zhuǎn)膜不成功
已經(jīng)有22人回復(fù)
- gel-shift蛋白結(jié)合DNA的問(wèn)題
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 【求助/交流】什么是核蛋白什么是總蛋白？做western的時(shí)候有什么區(qū)別？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 浙江大學(xué)2007/2008年博士生入學(xué)分子生物學(xué)（甲）試題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 請(qǐng)教EMSA的有關(guān)問(wèn)題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 基金申請(qǐng)策略和技巧（中大）
已經(jīng)有21人回復(fù)
fuyuandj86
版主 (著名寫手)
己所不欲，勿施于人
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.015
- 金幣: 7578.5
- 散金: 493
- 紅花: 60
- 沙發(fā): 2
- 帖子: 1313
- 在線: 1387.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 544795
- 注冊(cè): 2008-04-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
- 管轄: 生物科學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-24 23:16:09
...山雨: 金幣+10, ★★★很有幫助 2013-07-25 17:43:35
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-24 23:16:09
...山雨: 金幣+10, ★★★很有幫助 2013-07-25 17:43:35
|
只要你蛋白不沉淀就沒(méi)事吧. 我理解EMSA是看的DNA或者RNA,只要DNA或者RNA結(jié)合到蛋白上,整個(gè)復(fù)合體就會(huì)帶負(fù)電荷.因?yàn)镈NA或者RNA的磷酸基團(tuán)帶有大量負(fù)電荷,蛋白的酸性堿性比起來(lái)不算什么.而且在大部分EMSA里只能看到Free DNA和Bound DNA的條帶,所以不在乎只有蛋白的條帶會(huì)跑到哪里. |
2樓2013-07-24 22:28:21
beimi
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 29 (小學(xué)生)
- 金幣: 6040.3
- 散金: 2075
- 紅花: 33
- 帖子: 2460
- 在線: 540.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 947085
- 注冊(cè): 2010-01-22
- 性別: GG
- 專業(yè): 細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-25 12:48:56
...山雨: 金幣+7, ★★★很有幫助 2013-10-29 10:59:27
...山雨: 金幣+3, ★★★很有幫助 2013-10-29 10:59:52
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-25 12:48:56
...山雨: 金幣+7, ★★★很有幫助 2013-10-29 10:59:27
...山雨: 金幣+3, ★★★很有幫助 2013-10-29 10:59:52
|
First if you use the denature gel the protein and DNA will separate, so then all the samples are the same. so you do not know your protein bind to your DNA or not. second, it is not need to consider protein PI, because of shit you will know the binding of your protein to the DNA of interest. If you get the shit, that means your get the results, of course you should do some negative control. good luck! |
3樓2013-07-25 01:50:29
...山雨
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 3.1
- 散金: 31
- 帖子: 47
- 在線: 17小時(shí)
- 蟲號(hào): 1162701
- 注冊(cè): 2010-12-05
- 專業(yè): 昆蟲學(xué)
4樓2013-07-25 17:47:44
冰島硫化葉菌
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 13.5
- 帖子: 2
- 在線: 3.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 6089414
- 注冊(cè): 2017-03-21
- 專業(yè): 微生物學(xué)
|
我有一個(gè)疑問(wèn)就是，不僅是ESMA跑膠過(guò)程中的buffer是堿性，在DNA與蛋白孵育的過(guò)程中的binding buffer也是堿性的，那么在蛋白和DNA結(jié)合的這個(gè)過(guò)程中，蛋白質(zhì)如果是中性的或者是酸性的，那么就是帶負(fù)電，那么蛋白怎么與帶負(fù)電的DNA結(jié)合呢？因?yàn)槲业膶?shí)驗(yàn)中現(xiàn)在遇到這個(gè)問(wèn)題，蛋白等電點(diǎn)是7.5,EMSA試驗(yàn)中檢測(cè)不到shift條帶，且存在很明顯的堵孔現(xiàn)象。但footfrinting實(shí)驗(yàn)是能檢測(cè)到有明確的結(jié)合位點(diǎn)的。 |
5樓2017-03-25 19:27:50
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 ...山雨 的主題更新
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料學(xué)碩333求調(diào)劑 +6 | 北道巷 2026-03-24 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿鄭州大學(xué)，080500學(xué)碩，總分317分求調(diào)劑 +4 | 舉個(gè)栗子oi 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +6 | land xuxu 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +7 | 元夕元 2026-03-20 | 8/400 |
|
|
[考研] 一志愿 西北大學(xué) ，070300化學(xué)學(xué)碩，總分287，雙非一本，求調(diào)劑。 +6 | 晨昏線與星海 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 總分322求生物學(xué)/生化與分子/生物信息學(xué)相關(guān)調(diào)劑 +5 | 星沉uu 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +9 | hhhhxn.. 2026-03-23 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 總分293求調(diào)劑 +6 | 加一一九 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +6 | 來(lái)好運(yùn)來(lái)來(lái)來(lái) 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑，求導(dǎo)師收 +7 | 天天好運(yùn)來(lái)上岸?/a> 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 306求0703調(diào)劑一志愿華中師范 +10 | 紙魚ly 2026-03-21 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +5 | 超級(jí)伊昂大王 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 335求調(diào)劑 +4 | yuyu宇 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 十三加油 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研]
 一志愿東華大學(xué)化學(xué)070300，求調(diào)劑
+7
|
2117205181 2026-03-21 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中農(nóng)業(yè)071010，總分320求調(diào)劑 +5 | 困困困困坤坤 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +3 | 墨墨漠 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求助 +5 | 夢(mèng)里的無(wú)言 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 336求調(diào)劑 +5 | rmc8866 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0805材料320求調(diào)劑 +3 | 深海物語(yǔ) 2026-03-20 | 3/150 |
|