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...山雨新蟲 (初入文壇)
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[求助]
EMSA實驗問題
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最近在做EMSA實驗，請教一個問題：做這個實驗跑非變性膠時為啥不用考慮蛋白質(zhì)的等電點呢，無論是酸性蛋白還是堿性蛋白都是用pH8.3的緩沖液？ [ Last edited by silicare on 2014-2-26 at 16:32 ] |
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fuyuandj86
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只要你蛋白不沉淀就沒事吧. 我理解EMSA是看的DNA或者RNA,只要DNA或者RNA結(jié)合到蛋白上,整個復(fù)合體就會帶負電荷.因為DNA或者RNA的磷酸基團帶有大量負電荷,蛋白的酸性堿性比起來不算什么.而且在大部分EMSA里只能看到Free DNA和Bound DNA的條帶,所以不在乎只有蛋白的條帶會跑到哪里. |
2樓2013-07-24 22:28:21
beimi
木蟲 (著名寫手)
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First if you use the denature gel the protein and DNA will separate, so then all the samples are the same. so you do not know your protein bind to your DNA or not. second, it is not need to consider protein PI, because of shit you will know the binding of your protein to the DNA of interest. If you get the shit, that means your get the results, of course you should do some negative control. good luck! |
3樓2013-07-25 01:50:29
...山雨
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