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Jianxiao_H金蟲(chóng) (正式寫手)
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[求助]
怎么做實(shí)時(shí)定量pcr？
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吐槽一句：學(xué)姐什么都不懂！！  現(xiàn)在有某昆蟲(chóng)的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果，也篩選出功能基因了。 想做定量pcr，比較功能基因在該昆蟲(chóng)不同齡期的表達(dá)規(guī)律。 該怎么開(kāi)始？ 序列有有多，我要從哪里開(kāi)始試劑引物？ 選TaqMan熒光探針還是SYBR熒光染料？如果用探針是不是還要設(shè)計(jì)探針�。� 選什么做內(nèi)參基因？應(yīng)該是要選一個(gè)在不同年齡階段均表達(dá)穩(wěn)定的基因吧。18S rRNA可以么？ 還有能不能給我解釋一下，外標(biāo)法和外參法有什么區(qū)別、內(nèi)標(biāo)法，內(nèi)參等等這些易混淆的概念。 謝謝。  |
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Jianxiao_H
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3樓2013-07-26 11:22:16
changes
木蟲(chóng) (正式寫手)
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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩。 2013-07-25 20:57:16
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩。 2013-07-25 20:57:16
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是在不懂的話還是多看文獻(xiàn)吧，尤其是類似的材料的qRT-PCR。 文獻(xiàn)就是開(kāi)始的第一步。 如果只是對(duì)一些基因進(jìn)行不同發(fā)育期的表達(dá)譜分析，建議利用熒光染料做，當(dāng)然對(duì)于非常感興趣要進(jìn)行下游其它的研究的話可以設(shè)計(jì)個(gè)TaqMan探針(此時(shí)內(nèi)參基因也要利用TaqMan探針標(biāo)記)。 至于內(nèi)參基因的選擇也是利用文獻(xiàn)先檢索吧，如果實(shí)在是沒(méi)有相關(guān)文獻(xiàn)，那么光確定一個(gè)內(nèi)參基因就是一篇文章了。 其它的問(wèn)題還是先看文獻(xiàn)吧。有人認(rèn)為很簡(jiǎn)單，細(xì)致起來(lái)很繁瑣。 |
2樓2013-07-25 20:17:41
biomed_fanyi 
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4樓2013-07-26 11:58:08
Jianxiao_H
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5樓2013-07-26 13:02:04
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