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PCR重復(fù)不出來
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| pcr做了幾次，之前能P出來的，可是現(xiàn)在就是怎樣都做不出來了，有時就算做出來條帶也是非常的淺，只是為什么呢？12K左右的片段，是我的問題，還是這個確實是重復(fù)性不好？ |
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wangqi1107
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2樓2013-07-26 16:55:57
gyesang
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【答案】應(yīng)助回帖
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1949stone: 回帖置頂 2013-07-27 09:09:07
1949stone: 回帖置頂 2013-07-27 09:09:07
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長片段的DNA片段的確不太好擴增 1. 不知道樓主擴增12K這么長的片段，用的是什么模板，基因組DNA還是cDNA模板？模板的質(zhì)量怎樣？ 2. 擴增12K的長片段目的是什么呢，是鑒定還是構(gòu)建表達(dá)載體？如果是構(gòu)建表達(dá)載體，有沒有考慮過分段擴增克隆呢，然后再把片段fusion起來 3. 可以換一些擴增能力比較強的可以擴長片段的Taq酶試試，比如GoTaq, LA-Taq, Primerstar 4. 可以優(yōu)化一下體系，在PCR體系里面加一些反應(yīng)增強劑比如可以加些DMSO至終濃度5% 希望對你有啟發(fā)！ [ Last edited by gyesang on 2013-7-26 at 17:37 ] |
3樓2013-07-26 17:34:06
cicelyzh
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5樓2013-07-27 09:09:17
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6樓2013-07-27 11:26:17
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10樓2013-07-29 12:35:26
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