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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » PCR重復不出來
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[求助]
PCR重復不出來
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| pcr做了幾次，之前能P出來的，可是現(xiàn)在就是怎樣都做不出來了，有時就算做出來條帶也是非常的淺，只是為什么呢？12K左右的片段，是我的問題，還是這個確實是重復性不好？ |
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Sthunder
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7樓2013-07-27 11:43:02
wangqi1107
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2樓2013-07-26 16:55:57
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【答案】應助回帖
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1949stone: 回帖置頂 2013-07-27 09:09:07
1949stone: 回帖置頂 2013-07-27 09:09:07
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長片段的DNA片段的確不太好擴增 1. 不知道樓主擴增12K這么長的片段，用的是什么模板，基因組DNA還是cDNA模板？模板的質量怎樣？ 2. 擴增12K的長片段目的是什么呢，是鑒定還是構建表達載體？如果是構建表達載體，有沒有考慮過分段擴增克隆呢，然后再把片段fusion起來 3. 可以換一些擴增能力比較強的可以擴長片段的Taq酶試試，比如GoTaq, LA-Taq, Primerstar 4. 可以優(yōu)化一下體系，在PCR體系里面加一些反應增強劑比如可以加些DMSO至終濃度5% 希望對你有啟發(fā)！ [ Last edited by gyesang on 2013-7-26 at 17:37 ] |
3樓2013-07-26 17:34:06
cicelyzh
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4樓2013-07-27 00:51:50
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