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SDS-PAGE凝膠電泳跑出來的條帶問題
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做的是娃哈哈乳飲料的蛋白質(zhì)測(cè)定，直接從買來的乳飲料中取樣跑電泳。用的是15%的分離膠和5%的濃縮膠，但是跑出來的marker只有三條帶，而且顏色非常淡，樣品跑出來?xiàng)l帶拖尾，非常不理想，請(qǐng)問是什么原因呢？？？求指導(dǎo)那，跑了三四次都這樣，試劑溶液都是新配的，marker也是新買的。 201307243056.jpg |
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spaceman_jia 
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貌似protocol應(yīng)該沒有區(qū)別。 關(guān)鍵AP要新配，附件中等20min讓分離膠初步凝固已經(jīng)算保守了。 我通常整塊膠1個(gè)小時(shí)左右就完成了（10x8cm小膠，0.75或1mm厚不到一個(gè)小時(shí)，1.5mm厚會(huì)多等等），也可妥善保存過夜再用但不推薦。 加大用量會(huì)讓聚合度下降，盡管可以凝固。 我喜歡現(xiàn)用現(xiàn)配，上午制膠跑膠，下午可以染色(快染法2hr就出結(jié)果）或Western。 如果用舊的AP通常要凝結(jié)好幾個(gè)小時(shí)，甚至過夜，而且效果會(huì)變差。 |
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2013-07-28 13:45:31, 96.83 K
11樓2013-07-28 14:19:00
spaceman_jia
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你的染色看起來怪怪的，是G-250嗎 別直接用飲料原液，跑蛋白樣品需要純化�？梢赃x多種方法，如TCA沉淀，稀釋后超濾離心等。電泳之前測(cè)一下濃度再上樣。 關(guān)于marker，你可以跑一個(gè)空膠，只上marker看看。如果電泳本身ok，沒有樣品的情況下，marker可能會(huì)寬一些，但其他都應(yīng)該正常。 |
2樓2013-07-27 21:05:59
Sthunder
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