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[求助]
綠藻植物基因組DNA提取
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| 最近準(zhǔn)備提某種藻類植物的基因組DNA，新手上路，請(qǐng)大家推薦下手提用哪些方法好用點(diǎn)？ 還有一個(gè)問題，就是如何能夠去除色素？ |
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Sthunder
木蟲 (正式寫手)
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laozuzunzhe: 金幣+4, good！ 2013-08-02 11:16:49
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1 取鹽藻20 ml，4 000 rps離心3 min，用槍移上清，最后留約1 ml，吹勻后移到1.5 mlEP管內(nèi)，4 000 rps離心5 min。 2 向沉淀中加入567 μL的TE緩沖掖，用槍吹打使其充分懸浮，加3 μL的蛋白酶K（20mg/ml，該酶在95℃，10 min才失活），30 μL 10％的SDS，37 ℃溫育1 h(每15 min混勻一次) 3 加100 μL的5 M的NaCl，用槍混勻，再加80 μL CTAB/NaCl（該試劑在使用前65℃溫育使融化，再在室溫冷卻到30℃使用），混勻，65℃溫育10 min。 4 加等體積（約750μL）氯仿/異戊純（24/1），混勻（輕搖約5 min），12 000rps離心7 min，轉(zhuǎn)上清到新管中。 5 加等體積的酚/氯仿/異戊醇（25/24/1），12 000 rpm離心7 min，轉(zhuǎn)上清到新管中。 6 加入0.6體積的異丙醇，輕輕混合直到DNA沉淀下來，靜置5 min，12 000 rpm離心5 min，棄上清，用70％乙醇洗滌沉淀兩次（12 000 rpm離心1 min）。 7棄上清，放置使乙醇干燥。重溶于30～50μL TE（加RNA酶）中，65℃溫育15 min，然后放置-20℃冰箱保存。 注： 1 一般基因組DNA能比質(zhì)粒放得更久，且-20℃易降解而-80℃不易降解 2 步驟2中細(xì)胞懸浮后加入SDS和PK后可以直接顛倒EP管以混勻 3 步驟2后各步驟需要溫和操作，防止基因組斷裂。 4 CTAB提取液： NaCl 1.4MCTAB（w/v） 2％Tris•Cl 100mMEDTA 20mM巰基乙醇 0.2％ |
4樓2013-08-02 02:24:07
ecogene_wp
銀蟲 (初入文壇)
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2樓2013-08-01 21:44:07
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