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litingwen金蟲 (正式寫手)
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[求助]
藍藻DNA提取
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| 各位大俠，本人初接觸藍藻DNA提取，請問用什么方法提取比較好？ |
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Sthunder
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
litingwen: 金幣+3, ★★★★★最佳答案, 謝謝！ 2013-08-02 17:44:42
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1 取藻20 ml，4 000 rps離心3 min，用槍移上清，最后留約1 ml，吹勻后移到1.5 mlEP管內(nèi)，4 000 rps離心5 min。 2 向沉淀中加入567 μL的TE緩沖掖，用槍吹打使其充分懸浮，加3 μL的蛋白酶K（20mg/ml，該酶在95℃，10 min才失活），30 μL 10％的SDS，37 ℃溫育1 h(每15 min混勻一次) 3 加100 μL的5 M的NaCl，用槍混勻，再加80 μL CTAB/NaCl（該試劑在使用前65℃溫育使融化，再在室溫冷卻到30℃使用），混勻，65℃溫育10 min。 4 加等體積（約750μL）氯仿/異戊純（24/1），混勻（輕搖約5 min），12 000rps離心7 min，轉(zhuǎn)上清到新管中。 5 加等體積的酚/氯仿/異戊醇（25/24/1），12 000 rpm離心7 min，轉(zhuǎn)上清到新管中。 6 加入0.6體積的異丙醇，輕輕混合直到DNA沉淀下來，靜置5 min，12 000 rpm離心5 min，棄上清，用70％乙醇洗滌沉淀兩次（12 000 rpm離心1 min）。 7棄上清，放置使乙醇干燥。重溶于30～50μL TE（加RNA酶）中，65℃溫育15 min，然后放置-20℃冰箱保存。 注： CTAB提取液： NaCl 1.4MCTAB（w/v） 2％Tris•Cl 100mMEDTA 20mM巰基乙醇 0.2％ |
2樓2013-08-02 09:28:55
tianzhibin
至尊木蟲 (著名寫手)
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3樓2013-08-02 14:37:23
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我們實驗室的提取方法： 1、 取3 ml藻，1200rpm離心30s，棄上清，加入400μl TE Buffer重懸； 2、 加入少量石英砂，200μl 飽和酚，200μl氯仿/異戊醇（24/1 v/v），劇烈震蕩1min； 3、 12000rpm 離心10min，取上清約400μ，加入1μRNaseA，37℃ 30min 消化RNA； 4、 加入400μ氯仿/異戊醇（24/1 v/v）， 12 000 rpm離心10 min； 5、 取上清300μ，加入60μ（1/5體積）5M NaCl和720μ（2倍體積）無水乙醇，-20℃沉降4hr； 6、 4℃ 12000rpm離心10min，棄上清，加入700μ 70%乙醇洗沉淀物； 7、 4℃ 7500rpm離心5min，棄上清，點離，徹底吸出乙醇； 8、室溫干燥，加入20μ去離子水或TE Buffer溶解。 |
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litingwen4樓2013-08-03 00:54:08
如果可以123
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5樓2013-08-04 18:20:50
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6樓2013-08-19 14:04:04
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