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shiliyusly新蟲(chóng) (小有名氣)
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QPCR之?dāng)?shù)據(jù)處理
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大家好，我在做QPCR對(duì)于儀器自動(dòng)設(shè)定的熒光閾值有點(diǎn)困惑，想請(qǐng)教下高手。 我用的是Stratagene mx3000p QPCR儀。 1 完全相同的東西，儀器2次做給的熒光閾值不同； 2 不同基因一起做，將2個(gè)基因全選中讀取數(shù)據(jù)時(shí)給的熒光閾值是相同的，但是如果單個(gè)基因分開(kāi)選中熒光閾值不同。 我研究的是不同成熟度楊梅的特定基因的表達(dá)差異，必須保證同個(gè)基因的不同樣品熒光閾值相同，這樣可以分析該基因的表達(dá)差異。但是不能比較不同基因之間的表達(dá)差異，因?yàn)椴煌驘晒忾撝祪x器設(shè)定的不同。是這樣嗎？ 如果我在上面的基礎(chǔ)，加上不同品種楊梅的比較，2個(gè)品種的楊梅5個(gè)成熟度A基因表達(dá)差異比較，儀器分2次做，一次一個(gè)品種，由于儀器設(shè)定的熒光閾值不同，是要先調(diào)成一致嗎？手調(diào)的話可能不是在閾值合適的位置，查資料是說(shuō)要在3-15個(gè)循環(huán)偏差的10倍。 下面的圖是儀器上的閾值設(shè)置選項(xiàng)，好像不是所說(shuō)的3-15個(gè)循環(huán)偏差的10倍，看不懂，麻煩高手指點(diǎn)��！感激不盡�。�！ psb.jpg IMG20130810171714.jpg [ Last edited by shiliyusly on 2013-8-10 at 22:14 ] |
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wolong1984
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