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鍵盤上的腳丫金蟲 (小有名氣)
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[求助]
瓊脂糖電泳rna ，跑成這樣，是怎么回事？求指導(dǎo)
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Sample Text 我做的是馬氏珠母貝的外套膜和邊緣膜的RNA的提取 操作步驟是這樣的： 1、樣品早上10點(diǎn)從貝中提取出來，接著在液氮中凍存并保存了4個小時(shí) 2、下午2點(diǎn)做，用于depc處理過的2微升管取樣并加入tirzol 1ml，加入小鋼珠，用勻漿器勻漿8分鐘 3、用鑷子取出小鋼珠，放置5min 4、加入氯仿200微升，渦旋30s 4、12000r，4℃，15min 5、吸取上清400微升于depc處理過的1.5ml離心管中，異丙醇400微升 6、室溫放置10min 7、12000r，4℃，10min 8、棄去上清，加入1ml 的75%depc配置的乙醇，劇烈震蕩 9、12000r，4℃，5min 10、在垂直層流操作臺晾干10min，加入20微升的depc水溶解（沒有pcr ，也沒有測過其濃度，師姐說不用，測沒意義）。 11、瓊脂糖凝膠電泳 ，其余樣品-80℃保存。 12、瓊脂糖凝膠的配置： 凝膠濃度：1% 電壓：120V 電流：60MA 跑的時(shí)間：30min 緩沖液：0.5xTBE RNA電泳圖.PNG [ Last edited by 鍵盤上的腳丫 on 2013-8-19 at 20:53 ] |
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3樓2013-08-19 21:13:38
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鍵盤上的腳丫: 回帖置頂 2013-08-20 18:06:56
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這是我中午測得od值，看到曲線之后，我大概知道自己做錯了那些，在此提給大家，望大家引以為戒。 由圖可得： 1、編號1、2的兩個樣品都是屬于提出了RNA， 但是里面的量太少。 2、編號3、4、5、6這四個樣品，都出現(xiàn)雙峰，很明顯之前操作的時(shí)候，沒有把酒精晾干，同時(shí)，降解也是比較厲害的，不能達(dá)到反轉(zhuǎn)錄的要求。 改進(jìn)措施： 1、晾干酒精，一定要去除 2、操作要迅速，可以先把1ml的tirzol和小鋼珠先準(zhǔn)備好，再加入樣品，迅速研磨，減少RNA降解的量 3、取貝的組織的時(shí)候，要小心，不要把生殖腺搞破，里面有很多讓RNA降解的酶。 4、在加入depc水制的75%酒精之后，應(yīng)該是輕輕的上下?lián)u晃兩次，而不是劇烈震蕩。 以上是小弟的總結(jié)，望各大蟲指點(diǎn)~ 謝謝~ 測OD.PNG |
11樓2013-08-20 18:01:03
【答案】應(yīng)助回帖
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貝類？建議先查找資料看是否有人提取過同類型的樣品。 有些樣品的RNA并不是都3條帶的。我提取只有一條帶的物種，也有一些其28非常弱，基本不可見。 你可以電泳時(shí)點(diǎn)一個正常樣品（動物肝臟或水稻）的total RNA marker右邊第二個孔那是明顯降解；但第一、三、四幾個并沒有明顯的拖尾。后面兩個是上樣量過多。 |
6樓2013-08-20 10:08:01
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5樓2013-08-19 22:32:12
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