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mckeil新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求助 關(guān)于RT PCR 內(nèi)參問(wèn)的問(wèn)題
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我做2BS細(xì)胞的P16 mRNA 和 Bmi-1的表達(dá)情況 怎么選擇內(nèi)參基因 我在NCBI上查看β-actin這個(gè)內(nèi)參 出來(lái)好多人類(lèi)的，，到底該用哪個(gè) 看不懂啊 誰(shuí)能告訴下 還有 誰(shuí)能幫我驗(yàn)證下引物設(shè)計(jì)的合理不合理 能不能擴(kuò)出來(lái) 贈(zèng)送 伊蘇7PC版激活碼1個(gè) 本人玩通了。。。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-08-22 00:03:47
mckeil: 金幣+10, ★★★很有幫助, 嗯 按照你說(shuō)的我已經(jīng)把引物設(shè)計(jì)好了 不過(guò)blast 不會(huì)用呢 我慢慢學(xué)一下的 2013-08-23 08:28:08
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mckeil: 金幣+10, ★★★很有幫助, 嗯 按照你說(shuō)的我已經(jīng)把引物設(shè)計(jì)好了 不過(guò)blast 不會(huì)用呢 我慢慢學(xué)一下的 2013-08-23 08:28:08
| 選realtime PCR 內(nèi)參基因的引物，如beta-actin,一般是取自文獻(xiàn)里面的，基本上所有的文獻(xiàn)都會(huì)給出所有REAL-TIME PCR基因的引物，你blast一下后可直接使用；關(guān)于你的特異基因的引物設(shè)計(jì)，一般先查下文獻(xiàn)，或者有網(wǎng)站收集這些realtime 引物的（人和小鼠的），確定沒(méi)有的再自己設(shè)計(jì)引物，最好100-200bp吧，跨外顯子和內(nèi)含子為上，條帶單一，其他無(wú)所謂吧。做realtime PCR之前一般都要用一般的PCR摸索一下反應(yīng)條件以及引物的特異性。 |
2樓2013-08-21 22:47:42
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