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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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kamiles_007

新蟲 (初入文壇)

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[交流] 最近實(shí)驗(yàn)室T載體連接一直都假陽(yáng)性

最近一個(gè)月來(lái)，實(shí)驗(yàn)室?guī)讉€(gè)同學(xué)包括我在內(nèi)，所有做分子的都是T載體連接總是得不到自己想要的陽(yáng)性克隆，菌液PCR的電泳圖顯示，連接上的片段總是比我的目的片段要短，不知道是什么原因！

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wh672

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1樓 2013-08-22 00:00:52

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雙子の殤

金蟲 (正式寫手)

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gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-09-30 22:26:11

可以試一下。。。http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=6254162&authorid=1216489

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7樓2013-08-24 13:50:10

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yujitianqing

鐵蟲 (正式寫手)

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★
kamiles_007(金幣+1): 謝謝參與

連接前膠回收過(guò)嗎？確保是純的DNA？

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2樓2013-08-22 08:51:55

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charrymiao

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kamiles_007(金幣+1): 謝謝參與
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-08-22 17:15:11

首先，你先測(cè)一下你核酸膠回收的濃度，看濃度怎么樣，說(shuō)不定膠回收操作有問(wèn)題。然后，看看你的連接條件是不是有什么問(wèn)題。電泳跑的短我也發(fā)生過(guò)，但是最后測(cè)序沒(méi)什么問(wèn)題，最后大家說(shuō)那染料有問(wèn)題。你下次多跑會(huì)兒，把膠的濃度稍微降低看看。希望能幫到你！

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3樓2013-08-22 11:26:50

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Da果凍

銅蟲 (初入文壇)

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kamiles_007(金幣+1): 謝謝參與
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-09-30 22:25:36

我們實(shí)驗(yàn)室以前也是碰到這樣的問(wèn)題，連接之前目的片段需要切膠回收，你得保證膠回收試劑盒的質(zhì)量，有較高的濃度連接T載體陽(yáng)性克隆才會(huì)多，而且摩爾比例要控制在目的片段:T載體=1:4左右，你再試試吧

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5樓2013-08-23 01:37:23

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