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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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許三多

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[求助] 重組質(zhì)粒測(cè)序有點(diǎn)突變，這樣的重組質(zhì)粒還能用嗎？

各位高人請(qǐng)幫忙�。�
我用pET-22b(+)構(gòu)建重組質(zhì)粒，做原核表達(dá)。測(cè)序結(jié)果回來(lái)，發(fā)現(xiàn)有兩個(gè)點(diǎn)突變，并且相應(yīng)的氨基酸也變了，如圖紅色方框。
這樣的情況，我重組的質(zhì)粒還能用嗎？
或者，能否有辦法來(lái)判斷下，突變后的蛋白結(jié)構(gòu)的變化有多大嗎？

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1樓 2013-09-22 00:25:37

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許三多: 金幣+10, ★有幫助 2013-09-22 10:52:58

這種剛好少一個(gè)氨基酸的比較少見(jiàn)啊,一般如果是構(gòu)建質(zhì)粒時(shí)候出錯(cuò)都是出現(xiàn)frame shift或者某個(gè)點(diǎn)突變
你這個(gè)比對(duì)的是構(gòu)建質(zhì)粒前和構(gòu)建質(zhì)粒后的序列嗎
還是就是把你質(zhì)粒的序列和數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)
有的蛋白有不同的isoform,可能你這個(gè)就剛好是另一種isoform,不影響功能的
建議你再仔細(xì)查查數(shù)據(jù)庫(kù),有沒(méi)有其他isoform

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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.

4樓2013-09-22 08:15:25

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starseacow

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許三多: 金幣+5, ★有幫助 2013-09-22 18:17:21

引用回帖:

7樓: Originally posted by 許三多 at 2013-09-22 11:39:01
這兩個(gè)位點(diǎn)中，有一個(gè)在以前的測(cè)序中出現(xiàn)過(guò)的。我能否認(rèn)為，這不是酶的問(wèn)題，是我模板變化的原因呢？...

這很有可能，兩個(gè)突變，一個(gè)來(lái)自于模板。

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11樓2013-09-22 16:43:46

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xuaoua

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重新構(gòu)建吧。

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2樓2013-09-22 04:53:29

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許三多: 金幣+5, ★有幫助 2013-09-22 11:38:45

這種情況就重新構(gòu)建吧，你無(wú)法確定氨基酸變化是否對(duì)蛋白的結(jié)構(gòu)與功能產(chǎn)生影響

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3樓2013-09-22 05:41:52

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4樓: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-09-22 08:15:25
這種剛好少一個(gè)氨基酸的比較少見(jiàn)啊,一般如果是構(gòu)建質(zhì)粒時(shí)候出錯(cuò)都是出現(xiàn)frame shift或者某個(gè)點(diǎn)突變
你這個(gè)比對(duì)的是構(gòu)建質(zhì)粒前和構(gòu)建質(zhì)粒后的序列嗎
還是就是把你質(zhì)粒的序列和數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)
有的蛋白有不同的iso ...

你好，非常謝謝你的回復(fù)。
是這樣子的，我是拿的構(gòu)建后的目的片段比對(duì)的，據(jù)庫(kù)里序列就是我提交的。
我也再按照你說(shuō)的去找找看，但愿會(huì)如你所說(shuō)吧。
謝謝

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5樓2013-09-22 10:57:08

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2樓: Originally posted by xuaoua at 2013-09-22 04:53:29
重新構(gòu)建吧。

這兩個(gè)位點(diǎn)中，有一個(gè)在以前的測(cè)序中時(shí)出現(xiàn)過(guò)的。我能否認(rèn)為，這不是酶的問(wèn)題，是我模板變化的原因呢？

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6樓2013-09-22 11:37:28

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3樓: Originally posted by starseacow at 2013-09-22 05:41:52
這種情況就重新構(gòu)建吧，你無(wú)法確定氨基酸變化是否對(duì)蛋白的結(jié)構(gòu)與功能產(chǎn)生影響

這兩個(gè)位點(diǎn)中，有一個(gè)在以前的測(cè)序中出現(xiàn)過(guò)的。我能否認(rèn)為，這不是酶的問(wèn)題，是我模板變化的原因呢？

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還有啊，我這個(gè)并沒(méi)有少一個(gè)氨基酸的？

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8樓2013-09-22 11:41:43

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這個(gè)重組質(zhì)粒應(yīng)該是不能用了，還是重新構(gòu)建載體吧，祝你好運(yùn)！

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做自己

9樓2013-09-22 11:57:32

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9樓: Originally posted by RUI1990 at 2013-09-22 11:57:32
這個(gè)重組質(zhì)粒應(yīng)該是不能用了，還是重新構(gòu)建載體吧，祝你好運(yùn)！

數(shù)據(jù)庫(kù)里的序列就是我提交的。這次出現(xiàn)的情況我一時(shí)也反映不過(guò)來(lái)了。我想再制一批模板跑PCR測(cè)序看看。因?yàn)槲野l(fā)現(xiàn)在酶切前的測(cè)序中，也存在第二個(gè)點(diǎn)突變，且是A的突變。所以我想如果我能證明不是Taq酶的問(wèn)題，我這個(gè)就有可能是isoform，那就安心多了。
謝謝你！

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10樓2013-09-22 13:30:08

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