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chenxiang29銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
pET-22b構建好了質(zhì)粒，表達不出來？
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構建好了之后IPTG誘導不成功，翻開以前跑的電泳圖，感覺構建好的重組質(zhì)粒大小理論上是6000bp左右，當然是超螺旋，但是電泳卻是3000bp多，附圖1（M,重組質(zhì)粒1,2，pET-22b）,不知道各位蟲友出現(xiàn)過這種問題么，酶切后是在5000以上，附圖2(只看line3 為雙酶切，line 5為 pet22b雙酶切) |
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chenxiang29
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myprayer: 金幣+1, 贈人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊�？鞓访恳惶� 2013-05-01 12:06:34
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蛋白表達不成功有很多原因,在排除基因序列問題之外一般有以下原因: 1 目的基因來源,特別對來在于真核生物的蛋白,在原核生物中表達一般需要看看稀有密碼子之類的東西,如果存在大量連續(xù)的稀有密碼子,則一般表達不成功 2 你所謂的表達不成功是看的總蛋白還是純化蛋白,需要對表達細胞的總蛋白,可溶蛋白和不溶蛋白最好跑膠時候有非誘導的樣品進行對照 3 最后就是宿主細胞了,有時候不同的宿主細胞也會影響蛋白表達,常用的有BL21, Rosseta, gammi,什么之類的DE3菌 蛋白表達問題很多的，如果可以做個WB確定一下，是蛋白不能表達還是表達量低。 希望對你有用！ |
5樓2013-05-01 10:31:56
chenxiang29
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8樓2013-05-30 21:17:48
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