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chenxiang29銀蟲 (正式寫手)
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pET-22b構(gòu)建好了質(zhì)粒，表達(dá)不出來？
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構(gòu)建好了之后IPTG誘導(dǎo)不成功，翻開以前跑的電泳圖，感覺構(gòu)建好的重組質(zhì)粒大小理論上是6000bp左右，當(dāng)然是超螺旋，但是電泳卻是3000bp多，附圖1（M,重組質(zhì)粒1,2，pET-22b）,不知道各位蟲友出現(xiàn)過這種問題么，酶切后是在5000以上，附圖2(只看line3 為雙酶切，line 5為 pet22b雙酶切) |
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cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1<br>chenxiang29: 金幣+5, <font color=red>★★★</font>很有幫助 <font color="gray">2013-05-01 11:11:23</font>
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蛋白表達(dá)不成功有很多原因,在排除基因序列問題之外一般有以下原因: 1 目的基因來源,特別對(duì)來在于真核生物的蛋白,在原核生物中表達(dá)一般需要看看稀有密碼子之類的東西,如果存在大量連續(xù)的稀有密碼子,則一般表達(dá)不成功 2 你所謂的表達(dá)不成功是看的總蛋白還是純化蛋白,需要對(duì)表達(dá)細(xì)胞的總蛋白,可溶蛋白和不溶蛋白最好跑膠時(shí)候有非誘導(dǎo)的樣品進(jìn)行對(duì)照 3 最后就是宿主細(xì)胞了,有時(shí)候不同的宿主細(xì)胞也會(huì)影響蛋白表達(dá),常用的有BL21, Rosseta, gammi,什么之類的DE3菌 蛋白表達(dá)問題很多的，如果可以做個(gè)WB確定一下，是蛋白不能表達(dá)還是表達(dá)量低。 希望對(duì)你有用！ |
5樓2013-05-01 10:31:56
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