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tangmincui新蟲 (小有名氣)
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[交流]
蛋白純化，現(xiàn)在有四條蛋白條帶不知道怎么分開，求助大俠！
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我是從菌體超聲后上清中發(fā)現(xiàn)有活性的菌，老師讓我純化出功能蛋白。我將菌體超聲后離心，將上清過(guò)濾，作為樣品。最開始用試管小試法，初步確定陰離子交換能掛住蛋白，并且在0到1MNaCl中洗脫出(0,200,300,500,800,1000mmolNaCl)活性蛋白.所以決定用DEAE陰離子交換來(lái)，純化蛋白，過(guò)柱子。柱子是1ml預(yù)裝柱。 上樣量：3ml，平衡液：Tris-HCl pH 7.4（50mMTris，50mM NaCl）,洗脫液：1MNaCl (之前沒(méi)測(cè)PH值，有一次測(cè)了是7.36)但是每次都洗脫出活性蛋白了。凍干后跑電泳，有四條帶，大約是66KDa，44KDa，30KDa，20KDa，重復(fù)了5次結(jié)果都是這樣。 上樣量3ml可能有點(diǎn)大，但是改成1ml時(shí)，收集的蛋白活性不好了。 請(qǐng)問(wèn)大俠，改變ph怎么改變，怎么分離這四種蛋白， 木有金幣了，謝謝大家了。 |
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