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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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CS—園藝

新蟲(chóng) (初入文壇)

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蟲(chóng)號(hào): 2557607

[交流] PCR的操作應(yīng)注意什么？

做了幾次PCR都做不出來(lái)，RT—PCR做不出來(lái)，當(dāng)我嘗試用DNA做PCR的時(shí)候可以做出來(lái)了，但之后做DNA PCR由做不出來(lái)了，試劑是沒(méi)有問(wèn)題的。我整個(gè)過(guò)程在冰浴上做，會(huì)不會(huì)是這里出了問(wèn)題？

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1樓 2013-09-29 09:49:02

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CS—園藝

新蟲(chóng) (初入文壇)

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試劑劑量
無(wú)菌水 39μl
10×buffer 5 μl
dNTP（10mmol/L） 1 μl
引物ALF171697 1 μl
引物ALF171698 1 μl
CDNA 2 μl
B Taq酶（含Mg2+） 1 μl
總和
50 μl

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3樓2013-09-29 10:06:12

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feilinshiji

銀蟲(chóng) (小有名氣)

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gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-09-29 19:51:15

親，影響PCR的因素太多了，比如引物的設(shè)計(jì)、模板的提取、反應(yīng)條件的設(shè)置等等，你說(shuō)的太籠統(tǒng)了，沒(méi)法確定究竟是哪兒出了問(wèn)題

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4樓2013-09-29 10:49:03

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北極胖熊

新蟲(chóng) (小有名氣)

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蟲(chóng)號(hào): 2685710

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CS—園藝(金幣+1): 謝謝參與
gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-09-29 20:24:34

cDNA電泳一下看是否有東西,試劑沒(méi)問(wèn)題,引物沒(méi)問(wèn)題肯定就是模板有問(wèn)題

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6樓2013-09-29 15:20:01

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yinerde

銅蟲(chóng) (小有名氣)

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帖子: 97
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CS—園藝(金幣+1): 謝謝參與
gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-09-29 20:24:41

個(gè)人覺(jué)得是不是dNTP加的有點(diǎn)少呢，我們實(shí)驗(yàn)室25ul體系加4uldNTP（Takara公司現(xiàn)成試劑，忘了濃度是多少了）

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7樓2013-09-29 16:37:25

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簡(jiǎn)單回復(fù)

求不重復(fù)2樓

2013-09-29 09:53 回復(fù)

CS—園藝(金幣+1): 謝謝參與
縮++影: 金幣-1, 專業(yè)版塊請(qǐng)認(rèn)真回答問(wèn)題，謝絕灌水，謝謝合作！ 2013-09-29 10:11:18

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