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zhangyep121銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
跟大家請教一個(gè)熒光定量PCR的問題 已有2人參與
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| 注意是熒光定量PCR，不是普通PCR，現(xiàn)在由于一些特殊原因，我想設(shè)計(jì)一組引物，擴(kuò)增片段長度為1200bp左右，請問有沒有可行性，將變性和延伸時(shí)間加長可以嗎？探針設(shè)計(jì)有特殊要求嗎？主要問題是這么長的擴(kuò)增片段主要會(huì)出現(xiàn)什么問題，請各位幫忙，謝謝啦！ |
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r529887327
新蟲 (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
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myprayer: 金幣+2, 贈(zèng)人玫瑰，手有余香。分子生物期待更詳細(xì)的解答 2013-10-09 22:00:09
zhangyep121: 金幣+5, ★有幫助, 謝謝，離5段近一些這個(gè)建議不錯(cuò)，會(huì)考慮一下 2013-10-10 08:50:37
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一般熒光定量PCR擴(kuò)增片段在100-200bp, 如果要1200bp,應(yīng)該不是為了檢測這個(gè)基因存在不存在，或者像檢測PCR反應(yīng)的進(jìn)程吧？ 理論上應(yīng)該是可行的，擴(kuò)增的時(shí)間延長，而且1200長的產(chǎn)物，在設(shè)計(jì)探針的時(shí)候，選擇的余地很大。在延伸的過程中，遇到探針后開始切除檢測釋放出熒光，所以探針的5’端離引物近一些的話，熒光就會(huì)出現(xiàn)的快一些。 沒有做過，但是很有興趣知道實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 樓主好運(yùn)！ |
2樓2013-10-09 17:10:23
zgb1982
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4樓2013-10-09 20:54:43
zhangyep121
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5樓2013-10-10 09:00:41
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