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zhangyep121銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
跟大家請教一個熒光定量PCR的問題 已有2人參與
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| 注意是熒光定量PCR，不是普通PCR，現(xiàn)在由于一些特殊原因，我想設計一組引物，擴增片段長度為1200bp左右，請問有沒有可行性，將變性和延伸時間加長可以嗎？探針設計有特殊要求嗎？主要問題是這么長的擴增片段主要會出現(xiàn)什么問題，請各位幫忙，謝謝啦！ |
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zgb1982
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4樓2013-10-09 20:54:43
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+2, 贈人玫瑰，手有余香。分子生物期待更詳細的解答 2013-10-09 22:00:09
zhangyep121: 金幣+5, ★有幫助, 謝謝，離5段近一些這個建議不錯，會考慮一下 2013-10-10 08:50:37
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一般熒光定量PCR擴增片段在100-200bp, 如果要1200bp,應該不是為了檢測這個基因存在不存在，或者像檢測PCR反應的進程吧？ 理論上應該是可行的，擴增的時間延長，而且1200長的產(chǎn)物，在設計探針的時候，選擇的余地很大。在延伸的過程中，遇到探針后開始切除檢測釋放出熒光，所以探針的5’端離引物近一些的話，熒光就會出現(xiàn)的快一些。 沒有做過，但是很有興趣知道實驗結果。 樓主好運！ |
2樓2013-10-09 17:10:23
3樓2013-10-09 17:47:17
zhangyep121
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5樓2013-10-10 09:00:41
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