 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3749 | 回復(fù): 9 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
s24512453新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
有關(guān)T載體以及藍白篩選的3個問題
|
|
|
將目的片段與T載體連接，之后轉(zhuǎn)化，藍白篩選 1.長出白斑，說明T載體之間連上了片段，此片段就應(yīng)該是目的片段了，因為之前的電泳確定目的片段為單一條帶，割膠回收后再跑電泳也是單一條帶，但是后續(xù)的測序要么是片段大小不對，要么是空載。 2平板在4度放了一段時間拿出來確定菌落是白色，第二天再看還是白色，不可能是傳說中的沒有變藍，難道空載的也會是藍色？那藍白篩選還有什么作用 3菌落pcr有正確條帶，對相應(yīng)的菌提取質(zhì)粒，送去測序后結(jié)果總是不對，這是為何？感受態(tài)轉(zhuǎn)化之后的涂布量應(yīng)該怎么控制，會不會是我涂布了過多的菌泥導(dǎo)致游離的質(zhì)粒都附著在了菌落上或者周圍，導(dǎo)致的結(jié)果就是挑取十個白斑，十個白斑pcr都正確，結(jié)果測序都不對，這種可能性應(yīng)該不大吧 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有87人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 藍白斑篩選白色菌落PCR無條帶
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 克隆基因，用PMD19-T載體轉(zhuǎn)天根的感受態(tài)細胞，菌落少，測的序列全是空載體，求原因·
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 藍白斑篩選沒有菌落，或者都是白斑，是什么情況
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 關(guān)于目的基因不同向連接到T載體上的問題
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 最近做T克隆都是陰性，怎么回事？
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 藍白斑篩選 菌落成串
已經(jīng)有15人回復(fù)
- T載體連接問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 構(gòu)建克隆載體時出現(xiàn)的問題
已經(jīng)有11人回復(fù)
- PMD19-T載體連接不上428bp的片段
已經(jīng)有20人回復(fù)
- Amp、IPTG和X-gal的使用
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 菌落PCR篩選
已經(jīng)有17人回復(fù)
- T載體連接目的片段后做藍白斑全都是假陽性
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 長片段DNA如何連接載體
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 【求助】基因克隆T載體酶切問題等
已經(jīng)有8人回復(fù)
- pGEM-T Easy載體的相關(guān)問題-討論
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 藍白斑篩選問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 藍白斑篩選出現(xiàn)的問題
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助】T載體轉(zhuǎn)化DH5α，平板上沒有斑
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 【求助/交流】克隆Amp/Kan選擇以及藍白篩選
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于T載體連接問題
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 【求助/交流】TA克隆為什么會長出藍斑
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】藍白斑篩選
已經(jīng)有6人回復(fù)
zgb1982
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 46 (小學(xué)生)
- 金幣: 2895.3
- 紅花: 3
- 帖子: 536
- 在線: 227.2小時
- 蟲號: 664342
- 注冊: 2008-11-29
- 專業(yè): 植物病理學(xué)
3樓2013-10-12 21:20:58
yang0071
木蟲 (職業(yè)作家)
- 應(yīng)助: 207 (大學(xué)生)
- 金幣: 1573.4
- 散金: 9319
- 紅花: 21
- 帖子: 4041
- 在線: 647.7小時
- 蟲號: 50941
- 注冊: 2004-07-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
2樓2013-10-12 15:31:28
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時
- 蟲號: 1614001
- 注冊: 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流！ 2013-10-13 02:42:43
gyesang: 回帖置頂 2013-10-13 02:42:45
s24512453: 金幣+5 2013-10-13 08:22:02
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流！ 2013-10-13 02:42:43
gyesang: 回帖置頂 2013-10-13 02:42:45
s24512453: 金幣+5 2013-10-13 08:22:02
|
1. 白斑說明有插入，是不是目的片段就不一定了，所以藍白斑只是初篩，需要進一步鑒定。 2. 空載體是藍斑。 3. 菌落PCR會有假陽性的可能。對陽性克隆提質(zhì)粒做酶切鑒定后再送測序。轉(zhuǎn)化涂布的量一般考經(jīng)驗控制，新手可以多涂幾個不同量的板子。菌落PCR一般用的是載體上的引物，如果用片段特異性引物也是一個用片段特異引物，一個用載體上的引物。所以你說的什么游離DNA影響PCR擴增的假設(shè)基本不成立。而且你也對陽性克隆提取了質(zhì)粒，應(yīng)該先做酶切鑒定，酶切圖譜正確后再測序。 |
4樓2013-10-13 01:40:09
s24512453
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 252.5
- 帖子: 28
- 在線: 20.6小時
- 蟲號: 1989342
- 注冊: 2012-09-10
- 專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)
5樓2013-10-13 08:24:20
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[碩博家園] 求調(diào)劑 有機化學(xué)考研356分 +9 | Nadiums 2026-03-25 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +10 | 張zz111 2026-03-27 | 11/550 |
|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +4 | 邱gl 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 各位老師好，我的一志愿為北京科技大學(xué)085601材料專碩 +9 | Koxui 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑：一志愿湖南大學(xué) 材料與化工（085600），已過六級。 +4 | XX小鄧 2026-03-29 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +3 | 種圣賜 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑，求導(dǎo)師收 +9 | 天天好運來上岸?/a> 2026-03-24 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化085600材料專碩275|有文章專利｜求調(diào)劑 +7 | Micky11223 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿華北電力大學(xué)能動專碩，293，求調(diào)劑 +3 | 15537177284 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +12 | PolarBear11 2026-03-26 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 一志愿南師大0703化學(xué) 275求調(diào)劑 +4 | Ripcord上岸 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 305求調(diào)劑 +5 | 哇盧卡庫 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 劉柯@ 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)338求調(diào)劑！ +6 | Zuhui0306 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +6 | wasdssaa 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué) 296 求調(diào)劑 +4 | 朵朵- 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑總分293英一數(shù)二 +4 | 鋼鐵大炮 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料科學(xué)與工程 317求調(diào)劑 +4 | JKSOIID 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 機械學(xué)碩總分317求調(diào)劑�。。�！ +4 | Acaciad 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿南航材料專317分求調(diào)劑 +5 | 炸呀炸呀炸薯條 2026-03-23 | 5/250 |
|