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[交流]
生工測序重疊峰交流
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我在做表達(dá)載體（表達(dá)一段小rna全長138bp），構(gòu)建后的載體熱擊入top10，單菌落挑出來（但是菌落太密集，可能會不小心把兩個菌落增到一個區(qū)域。）。 經(jīng)過篩菌，提質(zhì)粒雙酶切和pcr驗(yàn)證條帶成功。然后送測序，結(jié)果生工返回的結(jié)果： 原文：“7號，19號 （使用引物 PBV220R） 測序后發(fā)現(xiàn)有重疊現(xiàn)象”，然后給了我用PBAD-F_J引物測序的結(jié)果。上blast之后結(jié)果是一個載體序列。 百思不得其解。 1：如果是重疊峰。怎么還給了一個結(jié)果。 2：如果我酶切驗(yàn)證的條帶都出來了。怎么測序還會是空的呢。 目前自我分析結(jié)果：1可能長出來的單菌落比較密集。篩菌時候混雜了帶有空載體的菌。2但是這樣的話。為什么還給了結(jié)果呢？3生工靠譜嗎？怎么解決呢。是不是我吧增的菌再畫個4區(qū)然后再增下驗(yàn)證再測序呢？ 求有測序經(jīng)驗(yàn)的朋友幫忙分析解釋下吧!謝謝 測序7號19號.png [ Last edited by 沙門小rna on 2013-10-14 at 17:35 ] |
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2013-10-14 17:23:37, 343.15 K
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9樓2013-11-28 15:24:08
4樓2013-10-15 10:29:25
★ ★ ★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2013-10-15 13:57:30
沙門小rna: 金幣+2, 我會告訴你我的序列太短了我直接blast顯示的是載體嗎？其實(shí)人家測序早就給我結(jié)果了。我tm真笨。只要直接把我的小rna序列和結(jié)果比對就好了。今天跟老板討論被罵了~ 2013-10-16 02:09:21
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2013-10-15 13:57:30
沙門小rna: 金幣+2, 我會告訴你我的序列太短了我直接blast顯示的是載體嗎？其實(shí)人家測序早就給我結(jié)果了。我tm真笨。只要直接把我的小rna序列和結(jié)果比對就好了。今天跟老板討論被罵了~ 2013-10-16 02:09:21
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在生工測序，最近的結(jié)果一會告訴我是雙峰，一會說沒信號，一會又測出來了，但是圖譜不好。 其他的都正常，讓我也百思不得其解。 后來辦法是，把測序不正常的重新劃錢分離，挑選單克隆，再送測序 |
5樓2013-10-15 12:32:22
★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
沙門小rna: 金幣+1 2013-10-17 02:14:43
沙門小rna: 金幣+1, 已經(jīng)測序好了。我sb了。序列結(jié)果blast出來發(fā)現(xiàn)是質(zhì)粒的匹配。因?yàn)槲业男蛄?38bp，被淹沒在茫茫數(shù)據(jù)庫中了。1000多的測序結(jié)果中那一點(diǎn)點(diǎn)的匹配被比了下去。 2013-10-17 17:09:33
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
沙門小rna: 金幣+1 2013-10-17 02:14:43
沙門小rna: 金幣+1, 已經(jīng)測序好了。我sb了。序列結(jié)果blast出來發(fā)現(xiàn)是質(zhì)粒的匹配。因?yàn)槲业男蛄?38bp，被淹沒在茫茫數(shù)據(jù)庫中了。1000多的測序結(jié)果中那一點(diǎn)點(diǎn)的匹配被比了下去。 2013-10-17 17:09:33
| 你可以自己做PCR擴(kuò)增包含出入片段的區(qū)域，然后電泳，如果獲得了目的片段，就把目的片段給生工測序，如果PCR都有問題的話那就有問題了 |
6樓2013-10-16 17:07:38
簡單回復(fù)
沙門小rna3樓
2013-10-15 10:28
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