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風(fēng)吹我已散木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
酶活求助�。。。。�！
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各位，求救!!!!!!!!! 我是要測(cè)一個(gè)在大腸桿菌里面異源表達(dá)的一個(gè)蛋白的酶活，這個(gè)酶原則上來(lái)說(shuō)，可以催化A和B生成C和D，反應(yīng)是不可逆的。然后我就搖菌，IPTG誘導(dǎo)，超聲破碎（PBS緩沖液+BSA+10%甘油）提蛋白，然后分光光度計(jì)測(cè)底物A的變化。變化是有了，可是負(fù)對(duì)照（不加IPTG誘導(dǎo)）也有變化�。ǖ孜顰的吸收值下降的程度和我加IPTG誘導(dǎo)后蛋白提取物的結(jié)果差不多）。然后我懷疑是不是我的這個(gè)轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌可以表達(dá)微量的目的蛋白，這微量的蛋白足以催化我的反應(yīng)？ 于是我把蛋白換成是蛋白提取液（PBS緩沖液+BSA+10%甘油），再加兩個(gè)底物A和B，結(jié)果，悲催了，分光光度計(jì)顯示的變化和之前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一樣！�。。。。。。。�！ 酶活實(shí)驗(yàn)步驟：1，空白對(duì)照（Tris+雙蒸水+蛋白粗提物+BSA), Measure Blank 2，Tris+雙蒸水+BSA+底物A, Measure Sample(底物A在A 300nm有最大吸收峰） 3， 加蛋白粗提物，Measure Sample 4，加底物B，Measure Sample（所有實(shí)驗(yàn)在此時(shí)，A 300nm下降劇烈，吸收值約變?yōu)橹暗?/4）。不知道是什么原因，我原本想著可能是目的蛋白在大腸桿菌里面的微量表達(dá)也注意催化我的反應(yīng)；可是不加蛋白，將試驗(yàn)中加蛋白的步驟換成是蛋白提取液（PBS緩沖液+BSA+10%甘油）， 分光光度計(jì)顯示的結(jié)果也基本一樣，到底是什么原因呢？是BSA的干擾么？還是？？？？？？ |
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 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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fuyuandj86
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3樓2013-10-18 22:34:06
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風(fēng)吹我已散
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4樓2013-10-19 09:47:31
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5樓2013-10-19 09:48:13
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