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櫻落夕鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
槭樹科DNA提取
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| 我在提取槭樹科紅楓的時(shí)候，DNA提不出來，或者提出來的含的雜質(zhì)太多了，加了PVP和抗壞血酸去雜質(zhì)，不管用，急求各給我解答，謝謝 |
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kkshaxqd
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【答案】應(yīng)助回帖
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本試驗(yàn)在參照陳坤松IS2]等提取DNA的方法基礎(chǔ)上加以改進(jìn)，找到更適合含多酚 累植物葉片基因組DNA提取的方法，具體步驟如下： (1)取100mg血紅雞爪槭葉片置液氮種冷凍，研磨成粉，迅速置入盛有l(wèi)ml DNA 提取緩沖液1(含209／L CTAB、20 g／L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、100mmol／L Tris—HCl (pH8．0)、25 mmol／L EDTA與2mol／LnaCl)的離心管中，再加入1％B一巰基乙醇，顛 倒混勻，置于冰浴中30min，其問不斷混勻，防止樣品結(jié)凍凝固于管底； (2)于4℃下以12000rpm離心lmin，棄上清，加入700pl 65預(yù)熱的DNA提取 緩沖液2，加1％B．巰基乙醇，震蕩混勻，于65℃水浴20min，離心10min； (3)吸取上清液于新離心管中，每管加入等體積Tris飽和酚／氯仿／異戊醇(25： 24：1)，輕輕顛倒混勻，冰上放置10min，4℃條件下12000rpm，離心10min； (4)取上清液，加等體積的氯仿／異戊醇，40c條件下12000rpm，離心10min； (5)轉(zhuǎn)移上清液于另一離心管，加2／3倍體積異丙醇，輕緩顛倒混勻，室溫放 置15min： (6)4。C條件下12000rpm，離心10min，去上清液； (7)加100pl的70％的無水乙醇洗滌沉淀2次，室溫下微干，溶于509lTE緩沖 液； (8)加入終濃度5099／ml的RNase，37℃保溫1h； (9)用等體積的氯仿／異戊醇抽提1次，12000rpm，離心10min； (10)上清液中加入O．1倍體積的Nacl，2倍體積的無水乙醇，冰箱中．20。C放置 0．5h，12000rpm，離心10min，出去上清液； (11)用70％的無水乙醇洗滌沉淀2次，自然干燥后溶于50plTE； (12)測OD值，瓊脂糖凝膠電泳分析。 |
9樓2013-10-29 15:56:41
starseacow
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2樓2013-10-21 18:22:38
櫻落夕
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3樓2013-10-25 13:06:09
kkshaxqd
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4樓2013-10-25 20:17:24
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