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杜龍飛

銀蟲(chóng) (初入文壇)

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[求助] 做Western blot ，煮蛋白樣,結(jié)果變成了黃綠色，怎么回事？已有1人參與

做Western blot ，煮蛋白樣,結(jié)果沉淀中的蛋白樣品煮了1min后變成了黃綠色，怎么回事？有沒(méi)有人遇到過(guò)這種情況啊？

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1樓 2013-10-28 19:51:01

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白玉子雙

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我在做pull down實(shí)驗(yàn)時(shí)也遇到過(guò)，我是在變性后的蛋白溶液中加入0.1微升的loading buffer，顏色就恢復(fù)了，我在網(wǎng)上看到的原因是變性溶液太酸，導(dǎo)致變黃，其實(shí)input沒(méi)有變黃，說(shuō)明確實(shí)是IP中蛋白太酸導(dǎo)致，具體更好的解決辦法與分析還需大家共同探討，希望多多交流。

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獨(dú)立做自己

7樓2016-03-21 20:51:03

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pennchem

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【答案】應(yīng)助回帖

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kx444555: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2013-10-29 15:58:22

可能loading buffer pH值偏離，我跑膠碰到過(guò)，沒(méi)有什么問(wèn)題

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行至水窮處，坐看云起時(shí)

2樓2013-10-28 19:52:52

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引用回帖:

2樓: Originally posted by pennchem at 2013-10-28 19:52:52
可能loading buffer pH值偏離，我跑膠碰到過(guò)，沒(méi)有什么問(wèn)題

我已經(jīng)換了新的Loading buffer，今天一個(gè)師姐告訴我是因?yàn)槲曳诺倪€原劑太多啦，可能是這個(gè)原因，下次試試少加點(diǎn)，謝謝你啦

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3樓2013-10-29 15:42:15

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haodanfeng

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如果你用這批Loading Buffer 處理其他的樣品沒(méi)出現(xiàn)此現(xiàn)象，只有這批樣品出現(xiàn)了此現(xiàn)象，說(shuō)明這批樣品的PH偏酸性，但是這不影響跑膠結(jié)果的~

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4樓2013-11-18 17:29:31

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