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幻影望晴新蟲 (初入文壇)
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[求助]藍(lán)白斑篩選不長菌 已有1人參與
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之前做過很多次都沒出現(xiàn)過這個(gè)問題，這次也是按照原來的方法做的，竟然不長菌。載體是天根的pGM-T，感受態(tài)是JM109，目的片段500bp左右，也是用天根的膠回收做的。失敗后，考慮了連接和感受態(tài)細(xì)胞的問題。 1.連接的驗(yàn)證 模板：載體試劑盒中的control insert DNA(700bp) 引物：SP6、T7 結(jié)果：  2.感受態(tài)細(xì)胞 本來以為是我的JM109是不是傳代出現(xiàn)問題了，用新的JM109做的。 A.連接載體轉(zhuǎn)入CP cell，37度振蕩培養(yǎng)1h后，有暈狀渾濁出現(xiàn)，涂于LB+（表面涂有IPTG16μl，X-gal 40μl)平板培養(yǎng)基，37度培養(yǎng)15小時(shí)，不長菌。 B.單獨(dú)的CP cell分別涂了LB+和LB-兩個(gè)平板培養(yǎng)基，兩個(gè)都長菌了，涂LB-的長的比LB+的多。 真的是特別的郁悶，請大家多多指教！先說聲謝謝��！ |
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