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zoemeig金蟲 (小有名氣)
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[求助]
蛋白純化問題
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| 想請(qǐng)問一下，我的蛋白不管咪唑怎么洗，還有過分子篩也都分不開，而且這個(gè)雜蛋白的分子量跟我的目的蛋白的分子量相差很多，至少有30kD，這是為什么？前幾天過陰離子交換柱，我的蛋白等電點(diǎn)在6.2左右，用的10mM Tris，20mM NaCl，pH 8.0緩沖液來平衡柱子，1M NaCl梯度洗脫，可蛋白全流穿了 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zoemeig(kx444555代發(fā)): 金幣+4, 鼓勵(lì)交流 2013-10-29 12:30:19
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用的10mM Tris，20mM NaCl，pH 8.0緩沖液來平衡柱子 陰離子交換柱用的10mM Tris，pH 8.0緩沖液來平衡柱子試試看， 陰離子交換柱不耐鹽，你的樣品過柱子前也要除鹽，不然掛不住。 建議樣品先用10mM Tris，pH 8.0緩沖液透析除鹽。 跑膠的時(shí)候，非變性膠也一起跑，和SDS-Page對(duì)比一下，看一看有沒有啥不一樣的。 |
2樓2013-10-29 11:36:45
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