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任天青金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
凝膠層析蛋白洗不下來(lái)
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各位大神: 我而今算是遇到了最詭異的事了。我用的是Sephadex G-75,手工分多次裝柱(沒(méi)有裝柱器),肉眼看來(lái)柱子裝的比較均勻。之前用藍(lán)色葡聚糖跑了一下,能跑出來(lái)。但不論是我的蛋白樣品或者是BSA溶液,核酸蛋白檢測(cè)儀均檢測(cè)不到蛋白質(zhì)存在。 詳細(xì)情況是這樣的: 1)第一次裝柱,藍(lán)色葡聚糖ok,將我的蛋白液【注】與藍(lán)色葡聚糖混合后再次上樣,結(jié)果在幾乎和藍(lán)色葡聚糖出來(lái)的同時(shí),檢測(cè)儀發(fā)現(xiàn)有大量蛋白正在洗出來(lái)了。但一個(gè)蛋白峰過(guò)后,再也沒(méi)有檢測(cè)到有任何蛋白洗出。 2)用緩沖液沖洗柱床過(guò)夜,次日,加入~1%床體積的BSA溶液,發(fā)現(xiàn)一個(gè)蛋白吸收峰都沒(méi)有了。 【注】:溶解目的蛋白液的緩沖液是柱緩沖液的5×形式,上樣前已經(jīng)10000g離心去除了上樣中的沉淀。柱是25× Φ2.5cm的,流速約1ml/min(恒壓)。 這個(gè)會(huì)的人應(yīng)該是很簡(jiǎn)單的,但小弟這邊還是自己摸索,希望大家給予點(diǎn)指導(dǎo)。不勝感激 |

專家顧問(wèn) (知名作家)
生物大分子降解酶
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專家經(jīng)驗(yàn): +248 |
| 如果你的蛋白質(zhì)樣品不是純品,那么第一次只有一個(gè)峰出來(lái),就表示該柱的分離效果為零。第二次沒(méi)有吸收峰,有可能是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)太少達(dá)不到檢測(cè)下限。 |

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