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小李愛學(xué)習(xí)銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
超濾濃縮后蛋白失去活性
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我是用ConA-Sepharose4B分離純化的酶， 因?yàn)橄疵摵竺敢褐泻休^高濃度的Nacl（0.5 M）和甲基甘露糖苷（0.4 M）所以用超濾管進(jìn)行了濃縮與緩沖液更換，結(jié)果酶活消失了。這個(gè)酶是蔗糖轉(zhuǎn)化酶，具有一定比例的糖鏈。 具體操作是： 1、洗脫酶液用超濾管濃縮。 2、將濃縮酶液加入到新的超濾管，加0.05M Tris-Hcl 7.1的再進(jìn)行超濾濃縮，這一步相當(dāng)與將Nacl和甲基甘露糖苷稀釋后又將酶進(jìn)行濃縮。 3、結(jié)果再測(cè)酶活，發(fā)現(xiàn)沒有活性了。 已經(jīng)出現(xiàn)過(guò)兩次這樣的事情了！ 我用超濾濃縮管原本是為了方便、快捷，沒想到會(huì)有這樣的情況，我每次都是用新的濃縮管，管子是密理博的，以前別的試驗(yàn)用過(guò)從沒出現(xiàn)這種問題，我認(rèn)為管子的質(zhì)量是沒問題的。 我認(rèn)為有可能是超濾管上的膜把酶吸附了或者是有別的原因。我現(xiàn)在已經(jīng)準(zhǔn)備用透析了。 請(qǐng)各位大家?guī)兔Ψ治鱿略�？或者有沒有其他的更換緩沖液的方法和濃縮方法？ 謝謝各位牛！ |
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