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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 超濾濃縮后蛋白失去活性
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超濾濃縮后蛋白失去活性
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我是用ConA-Sepharose4B分離純化的酶， 因為洗脫后酶液中含有較高濃度的Nacl（0.5 M）和甲基甘露糖苷（0.4 M）所以用超濾管進行了濃縮與緩沖液更換，結果酶活消失了。這個酶是蔗糖轉化酶，具有一定比例的糖鏈。 具體操作是： 1、洗脫酶液用超濾管濃縮。 2、將濃縮酶液加入到新的超濾管，加0.05M Tris-Hcl 7.1的再進行超濾濃縮，這一步相當與將Nacl和甲基甘露糖苷稀釋后又將酶進行濃縮。 3、結果再測酶活，發(fā)現(xiàn)沒有活性了。 已經(jīng)出現(xiàn)過兩次這樣的事情了！ 我用超濾濃縮管原本是為了方便、快捷，沒想到會有這樣的情況，我每次都是用新的濃縮管，管子是密理博的，以前別的試驗用過從沒出現(xiàn)這種問題，我認為管子的質量是沒問題的。 我認為有可能是超濾管上的膜把酶吸附了或者是有別的原因。我現(xiàn)在已經(jīng)準備用透析了。 請各位大家?guī)兔Ψ治鱿略�？或者有沒有其他的更換緩沖液的方法和濃縮方法？ 謝謝各位牛！ |
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3樓2013-12-03 17:00:24
gulpiye212
銅蟲 (初入文壇)
- 應助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 47.3
- 帖子: 43
- 在線: 17.4小時
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- 專業(yè): 微生物資源與分類學
2樓2013-12-03 16:23:18
4樓2013-12-04 13:16:09
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