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benpaopinle金蟲 (小有名氣)
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[求助]
氨基DNA與羧基CdTe量子點(diǎn)的連接
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| 各位大俠，小蟲一直嘗試EDC/NHS連接氨基DNA和羧基CdTe量子點(diǎn)，都沒能成功，參考的文獻(xiàn)做法不大一樣，但原理應(yīng)該是一致的，不知問題出在哪兒，焦急等待大俠相助�。�！我用的緩沖液是PB，活化液pH為6.0，50mM，不另外加鹽；反應(yīng)液pH為7.4，10mM，另外含有100mM的KCl！嘗試用pH6.0的緩沖液溶解量子點(diǎn)，并加入一定量的EDC/NHS（約100倍于量子點(diǎn)的濃度），經(jīng)活化后，放置一夜，有黑色顆�；蛐鯛畛恋懋a(chǎn)生，此時(shí)還有熒光，當(dāng)離心后，上清液無熒光，將黑色顆粒超聲分散到pH7.4的緩沖液后，再測(cè)沒有熒光了！還嘗試過直接用pH7.4 的緩沖液直接加EDC/NHS活化2h，后加入DNA 的，最后溶液也沒了熒光。前后兩次的溶液都為2mL，量子點(diǎn)濃度約為50nM，DNA為0.75uM！求助各位有經(jīng)驗(yàn)的大俠相助，會(huì)追加金幣�。�！ |
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 羧基活化EDC|DCC,NHS |
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benpaopinle
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真是不好意思，關(guān)于這個(gè)問題，我也是很迷茫，沒有很好的表征手段！我查過文獻(xiàn)，也詢問過師兄、老師，都沒有什么好的方法��！比如說從熒光方面，有文獻(xiàn)報(bào)道QDs修飾上DNA后表面缺陷減少，熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，但也有說熒光強(qiáng)度下降的，比如被DNA猝滅，但并沒有具體說明為什么；熒光發(fā)射位置前后不變或移動(dòng)很小。有關(guān)于紫外的變化，目前我也沒怎么嘗試，因?yàn)闃悠妨刻�，沒法處理，但從文獻(xiàn)上看，肯定有DNA的紫外峰，何況還能根據(jù)DNA的吸收強(qiáng)度估算每個(gè)量子點(diǎn)上修飾了幾條DNA。除了熒光、紫外，紅外也可以檢測(cè)酰胺鍵來判斷是否有修飾上。動(dòng)態(tài)光散射也可以根據(jù)修飾前后QDs的水力半徑來粗略估計(jì)，但樣品肯定是經(jīng)過離心洗脫后的了。除上面的手段外，我真不知道該怎么表征，TEM和SEM應(yīng)該看不到量子點(diǎn)表面的DNA啊，我真的也是很糾結(jié)...說這么多，也不知道你是怎樣修飾的？希望可以交流一下！ |
5樓2013-11-12 15:15:56
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7樓2013-11-17 22:19:25
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