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benpaopinle金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
氨基DNA與羧基CdTe量子點(diǎn)的連接
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| 各位大俠，小蟲(chóng)一直嘗試EDC/NHS連接氨基DNA和羧基CdTe量子點(diǎn)，都沒(méi)能成功，參考的文獻(xiàn)做法不大一樣，但原理應(yīng)該是一致的，不知問(wèn)題出在哪兒，焦急等待大俠相助！��！我用的緩沖液是PB，活化液pH為6.0，50mM，不另外加鹽；反應(yīng)液pH為7.4，10mM，另外含有100mM的KCl！嘗試用pH6.0的緩沖液溶解量子點(diǎn)，并加入一定量的EDC/NHS（約100倍于量子點(diǎn)的濃度），經(jīng)活化后，放置一夜，有黑色顆�；蛐鯛畛恋懋a(chǎn)生，此時(shí)還有熒光，當(dāng)離心后，上清液無(wú)熒光，將黑色顆粒超聲分散到pH7.4的緩沖液后，再測(cè)沒(méi)有熒光了！還嘗試過(guò)直接用pH7.4 的緩沖液直接加EDC/NHS活化2h，后加入DNA 的，最后溶液也沒(méi)了熒光。前后兩次的溶液都為2mL，量子點(diǎn)濃度約為50nM，DNA為0.75uM！求助各位有經(jīng)驗(yàn)的大俠相助，會(huì)追加金幣�。�！ |
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 羧基活化EDC|DCC,NHS |
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benpaopinle
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4樓2013-11-12 14:49:41
lucasone
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
benpaopinle: 金幣+10, ★★★很有幫助, 有知道了不少！謝謝！ 2013-11-19 10:24:58
benpaopinle: 金幣+10, ★★★很有幫助, 有知道了不少！謝謝！ 2013-11-19 10:24:58
| 第一種情況可以很明確的回答你，羧基穩(wěn)定的量子點(diǎn)（MPA或者TGA），是不能在酸性條件下穩(wěn)定存在的，所以你的6.0的緩沖溶液是不行的，酸性條件下會(huì)導(dǎo)致量子點(diǎn)團(tuán)聚沉淀，然后沒(méi)有熒光；你的第二種方法應(yīng)該是正確的，一般用超濾管先小轉(zhuǎn)速離心，出去溶液中多余的穩(wěn)定劑或者一些Cd和穩(wěn)定劑的絡(luò)合物，然后用7.4的PBS重新分散量子點(diǎn)，隨后加入EDC和NHS攪拌活化，在加入DNA或者抗原抗體攪拌反應(yīng)，然后4度過(guò)夜保存，第二天用紫外，熒光，紅外或者是動(dòng)態(tài)光散射表征。 |
9樓2013-11-18 14:48:29
benpaopinle
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很感謝你的回復(fù)，我倒是真沒(méi)用過(guò)超濾管離心，所以在樣品處理上有很大不足！其次，有關(guān)活化時(shí)間和活化后的QDs處理上我還在摸索，對(duì)條件沒(méi)有把握！至于你提到的反應(yīng)溫度，我表示有點(diǎn)疑問(wèn)，為什么不在室溫（文獻(xiàn)中說(shuō)的，具體不清楚）或37℃下反應(yīng)？關(guān)于表征的手段，我這兩天又再?lài)L試向修飾后的QDs中加入GO，來(lái)測(cè)熒光變化，以此來(lái)推斷是否有修飾上，不知蟲(chóng)友對(duì)此有何看法或建議？希望保持聯(lián)系！��！ |
12樓2013-11-19 10:40:27
ypgou123
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3樓2013-11-12 00:08:51
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真是不好意思，關(guān)于這個(gè)問(wèn)題，我也是很迷茫，沒(méi)有很好的表征手段！我查過(guò)文獻(xiàn)，也詢(xún)問(wèn)過(guò)師兄、老師，都沒(méi)有什么好的方法��！比如說(shuō)從熒光方面，有文獻(xiàn)報(bào)道QDs修飾上DNA后表面缺陷減少，熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，但也有說(shuō)熒光強(qiáng)度下降的，比如被DNA猝滅，但并沒(méi)有具體說(shuō)明為什么；熒光發(fā)射位置前后不變或移動(dòng)很小。有關(guān)于紫外的變化，目前我也沒(méi)怎么嘗試，因?yàn)闃悠妨刻伲瑳](méi)法處理，但從文獻(xiàn)上看，肯定有DNA的紫外峰，何況還能根據(jù)DNA的吸收強(qiáng)度估算每個(gè)量子點(diǎn)上修飾了幾條DNA。除了熒光、紫外，紅外也可以檢測(cè)酰胺鍵來(lái)判斷是否有修飾上。動(dòng)態(tài)光散射也可以根據(jù)修飾前后QDs的水力半徑來(lái)粗略估計(jì)，但樣品肯定是經(jīng)過(guò)離心洗脫后的了。除上面的手段外，我真不知道該怎么表征，TEM和SEM應(yīng)該看不到量子點(diǎn)表面的DNA啊，我真的也是很糾結(jié)...說(shuō)這么多，也不知道你是怎樣修飾的？希望可以交流一下！ |
5樓2013-11-12 15:15:56
supernatural: 屏蔽內(nèi)容, 請(qǐng)不要在回帖中留下聯(lián)系方式，這既是版規(guī)也是為了用戶(hù)自身的信息安全考慮，聯(lián)系方式可以站內(nèi)留額O(∩_∩)O~ 2013-11-19 11:17:48
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6樓2013-11-13 11:36:29
huterx
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